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• 作者：小翔小翔 发布时间：2022-08-14 22:59:02

  2022-8-8 打基础必看，必看

• 作者：ameisdfgh 发布时间：2019-12-01 16:44:27

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• 作者：Tzy 发布时间：2023-04-19 16:59:21

  一百年前中国西北可由此窥见一斑

• 作者：实现GCZY 发布时间：2022-05-20 17:11:40

  心理学哲学必备

• 作者：荣誉万州人 发布时间：2022-01-16 13:40:58

  不明所以地分成一堆问题和解答，配图像小学生读物，用纸和排版太差，从作者到出版都是垃圾

• 作者：王涛1985 发布时间：2011-07-23 11:43:42

  这本不错

• 路漫漫 其修远兮

  作者：笨笨的猪 发布时间：2017-09-30 16:34:46

  #

  碎碎念

  #2017年花时间最多（历时4个月）；最纠结（几次想弃书不读，由于物化基础太差）；但是也最有意思的一本书（虽然闭书默思后，觉得此书每个标点符号都是知识点，但是一个没记住）。泰勒斯在2000多年前如果有当今如此微观之技术，所带来的视野，估计也会失去仰望天空而哲思的兴趣，而转向探索一番我们自身的细胞世界。毕竟我们自身才是一切知识的本源啊。

  感谢翟中和院士的这本书，给我扫了个盲。

  当我昨晚终于翻到这一页appendix，有一种媳妇熬成婆的赶脚～～～

  希望在下个5年内，逐步学会画出各种细胞器，以及基本的蛋白调控示意图，应该很有意思。哇哈哈！没有要求的人生，是何等无趣！！！

  

  第381页

  细胞生物学 - 翟中和

  出版社：高等教育出版社

  版本号： 2011年6月 第四版

  细胞生物学、分子生物学、神经生物学和生态学并列为生命科学的基础科学

  参考读物：

  1. 斯坦福大学免费的数据库，提供918中期刊的 全文。包括著名的JCB、 PNAS、JBC等

  2. 美国科学院学报， 提供1915年以来的全文，一些经典细胞生物学论文发表于该刊。

  3. Pubmed，大名鼎鼎的免费数据库，属于美国国立医学图书馆，可查阅生物医学领域的文摘。

  4.

  http://blog.renren.com/share/492241664/16661375271

  （生科学霸汇之 - 细胞生物学）

  学习助手：

  1. 知乎 - 感谢知友：

  韦俊宏、

  杀生丸

  、

  景磊

  、

  godfinger

  、

  我烦好生无趣

  

  第一章 绪论

  第一节 细胞生物学研究的内容和现状

  一、现代生命科学中的一门重要的基础前沿学科

  P002: 当前细胞生物学研究的课题归纳起来包括3个根本性的问题：

  1）基因组是如何在时间和空间上有序表达的？与体外实验不同，在细胞内环境中基因表达程序受到严格的调节与控制，其调控网络的复杂性是迄今任何超级计算机都无法比拟的。这也正是细胞作为生物体结构与功能基本单位的奥妙所在；

  2）基因表达的产物是如何逐级组装成能行驶生命活动的基本结构体系及各种细胞器的？这种自组装过程的调控程序与调控机制是什么？这又是一个极富挑战性的研究领域。它应是结构生物学和新兴的纳米生物学研究的重要组成部分，很多生命活动的本质问题可能在这里找到答案；

  3）基因及其表达的产物，特别是各种信号分子与活性因子，是如何调节诸如细胞的增殖、分化、衰老与凋亡等细胞最重要的生命活动过程的？这些问题不仅涉及细胞生物学中诸多的核心问题，而且与人类的健康和生产实践密切相关。

  二、细胞生物学的主要研究内容

  P002: 细胞生物学研究与教学内容一般可分为细胞结构与功能和细胞重要生命活动两大基本部分，但它们又是不可分割的。

  P002: 当前细胞生物学的研究内容大致可归纳为以下10个方面：1）生物膜与细胞器；2）细胞信号传导；3）细胞骨架体系；4）细胞核、染色体及基因表达；5）细胞增殖及其调控；6）细胞分化及干细胞生物学；7）细胞死亡；8）细胞衰老；9）细胞工程；10）细胞的起源与进化。

  第二节 细胞学与细胞生物学发展简史

  P005: 现在许多科学家认为，可以把生物科学的发展划分为3个阶段：1）19世纪以及更早的时期，是以形态描述为主的生物科学时期；2）20世纪的前半个世纪，主要是实验生物学时期；3）20世纪50年代以来，由于DNA双螺旋结构的发现与中心法则的确立，开始进入了精细定性与定量的现代生物学时期。

  P006：人们通常称1838-1839年施旺和施莱登确立的细胞学说、1859年达尔文确立的进化论和1866年孟德尔确立的遗传学为现代生物学的三大基石。

  P008: 1953年J. Watson和F. Crick发现了DNA分子的双螺旋结构，随后，又提出了遗传中心法则，标志着分子生物学这一新兴学科的问世。正是由于分子生物学概念与技术的引入，分子生物学、生物化学、遗传学等学科与细胞学之间相互渗透与结合，使人们对细胞结构与功能的研究水平达到了新的高度。20世纪70年代以后，细胞生物学这一学科最后得以形成并确立。

  P008: 而多莉羊的诞生、人胚胎干细胞的建系和诱导性多潜能干细胞技术的建立等，则可以看成是生命科学研究从分子水平回归到细胞水平，深入探索生命奥秘的几个最新的重要标志，显示出细胞生物学的发展进入了一个新的阶段。这个新阶段的基本特点可大致归纳如下：1）以细胞（及其社会），特别是活体细胞为研究对象；2）以细胞重大生命活动为主要研究内容；3）在揭示细胞生命活动分子机制方面，以细胞信号调控网络为研究重点；4）在多层次上特别是纳米尺度上揭示细胞生命活动本质为目标；5）多领域、多学科的交叉研究成为细胞生物学研究的重要特征。总的特点是从细胞静态的分析到细胞生命活动的动态综合，这在很大程度上也反映了生命科学研究的趋势。#

  碎碎念

  #1）知识服务于“生存”，揭示细胞的生命（增殖、分化、死亡）是更好的了解，从而可能控制机体的生命周期；2）组装后整体协调，不管是内部还是外部，一定有沟通机制，这也是我们必须了解的课题，从而更好的控制过程；3）基于目的，交叉学科，或者说细分的学科，共同研究一定是个必然。

  第二章 细胞的统一性与多样性

  第一节 细胞的基本特征

  一、细胞是生命活动的基本单位

  1. 细胞是构成有机体的基本单位

  2. 细胞是代谢与功能的基本单位

  3. 细胞是有机体生长与发育的基础

  4. 细胞是繁殖的基本单位，是遗传的桥梁

  5. 细胞是生命起源的归宿，是生物进化的起点

  6. 关于细胞概念的一些新思考 - 细胞是多层次、非线性与多层次的复杂结构体系：

  1. 细胞是物质（结构）、能量与信息过程精巧结合的综合体 - 人们早已比较清楚线粒体与叶绿体在能量代谢中的中心地位，但能量转移过程中尚有许多问题有待阐明。

  2. 细胞是高度有序的，具有自组装能力的自组织体系 - 生物分子的自组装能力，依靠生物分子间的非共价相互作用。

  二、细胞的基本共性

  1. 相似的化学组成：各种细胞的基本构成元素都是碳（C）、氢（H）、氧（O）、氮（N）、磷（P）、硫（S）等几种，这些化学元素所形成的氨基酸、核苷酸、脂质和糖类，是构成细胞的基本构件。

  2. 脂 - 蛋白体系的生物膜：所有的细胞表面均有主要由磷脂双分子层与镶嵌蛋白质构成的细胞质膜，细胞质膜使细胞与周围环境保持相对的独立性，形成相对稳定的细胞内环境，并通过细胞质膜与周围环境进行物质交换和信号传递。在真核细胞内，细胞质膜内演化为细胞的内膜体系，构件成各种以膜为基础的功能专一的细胞器。生物膜也是细胞能量转换的基地。

  3. 相同的遗传装置：所有的细胞都以DNA储存盒传递遗传信息，以RNA作为转录物指导蛋白质的合成，蛋白质的合成场合都是核糖体，几乎所有的细胞都使用一套相同的遗传密码。这说明，所有的细胞都起源于共同的祖先。

  4. 一分为二的分裂方式：所有细胞的增殖都以一分为二的方式进行分裂，遗传物质在分裂前复制加倍，在分裂时均匀地分配到两个子细胞内，这是生命繁衍的基础和保证。所有现存细胞，都是由其祖先通过分裂产生。从进化的观点看，现存的所有细胞都来源于共同的祖先。

  第二节 原核细胞与古核细胞

  P012: 生物界最显著的差异表现在细胞层次，而不是个体之间的差异上。根据结构的这种差异，可以把细胞分为真核细胞（eukaryotic cell, eu是希腊语“真实”的意思，karyon是希腊语“核”的意思）与原核细胞(prokaryotic cell)两大类。

  P012: 整个生物界最基本的类群包括3个域：原核生物、古核生物、真核生物。相应地，生物被分为6个界：由原核生物组成的原核生物界，由古核生物组成的古核生物界，由真核生物组成的原生生物界、真菌界、植物界和动物界。

  一、原核细胞：原核生物在30 - 35亿年前就在地球上出现了，以细菌作为主要代表，并包括支原体、衣原体、立克次氏体、放线菌与蓝藻等多个庞大家族.

  二、最小最简单的细胞 - 支原体

  P013: 支原体（mycoplasma，又译为霉形体）是目前发现的能在无生命培基中生长繁殖的最小最简单的细胞，具备细胞的基本形态结构与功能。支原体没有细胞壁，只有细胞膜，所以支原体的形态可以随机变化；支原体的细胞膜含有胆固醇，比其他原核生物的质膜更坚韧，具有原核细胞膜所具有的多功能性。支原体的环状双螺旋DNA较均匀地散布在细胞内，没有像细菌一样的核区；mRNA与核糖体结合为多核糖体，指导合成约几百种蛋白质，这可能是细胞生存核增殖所必需的最低数量的蛋白质。支原体以一分为二的方式分裂繁殖。以上这些特征与非细胞形态的生命体 - 病毒是根本不同的。

  P013：最早发现的支原体为拟胸膜肺炎病原体 - PPLO（1898年发现，1967年正式命名为支原体），后来又从动物、植物体核环境中分离出很多支原体，它们中不少是致病的病原体，尤其是一些慢性病（呼吸道病、胸膜肺炎、关节炎与尿道炎等）的病原体很多都是支原体。支原体的体积很小，直径一般都是0.1 - 0.3um，仅为细菌的1/10。

  P013： 一个细胞生存与增殖必须具备的结构装置与机能是：细胞膜、DNA与RNA，一定数量的核糖体以及催化主要酶促反应所需要的酶。从保证一个细胞生命活动运转所必须的条件看，维持细胞基本生存的基因应该是200-300个，这些基因产物进行酶促反应所必须占有的空间直径约为50nm，加上核糖体（每个核糖体直径10-20nm)，细胞膜与核酸等，我们可以推算出来，一个细胞体积的最小极限直径为140-200nm，而现在发现的最小支原体细胞的直径已接近这个极限。因此，比支原体更小更简单的结构，似乎不可能满足生命活动的基本要求，也就是说支原体应该是最小最简单的细胞。#

  碎碎念

  #目前的细胞研究是从显微，亚显微和分子水平这三个层次上进行的。随着物理学，化学等技术的不断发展，谁又知道学科的深入会到达什么阶段呢？

  三、原核细胞的两个代表类群 - 细菌和蓝藻

  （一）细菌细胞：绝大多数细菌的直径大小在0.5 - 5.0um之间，当然还有极少的巨型细菌。细菌细胞没有典型的核结构，但绝大多数细菌有明显的核区或称类核（nucleoid），主要由一个环状DNA分子盘绕而成。核区四周是较浓密的胞质物质，除了核糖体外，没有类似真核细胞的细胞器。细菌细胞质膜是典型的生物膜结构，但它具有多功能性。

  1. 细菌细胞的表面结构：主要指细胞质膜、细胞壁及其特化结构：中膜体、荚膜与鞭毛等。细胞质膜是细胞表面的最重要结构。

  1. 细胞壁（cell wall)是位于细菌质膜外的一层较厚、较坚韧并略具弹性的结构。所有细菌的细胞壁都具有共同成分是肽聚糖，由乙酰氨基葡萄糖、乙酰胞壁酸与四五个氨基酸短肽聚合合成的多层网状大分子结构。革兰氏阳性菌与阴性菌的细胞壁成分与结构差异很明显，也是细胞呈革兰氏阳性反应和阴性反应的重要原因。

  PS：1）凡被染成紫色的细菌称为革兰氏阳性菌（G+菌）；染成红色的称为革兰氏阴性菌（G-菌）。2）常见的革兰氏阳性菌有：葡萄球菌（Staphylococcus）、链球菌(Streptococcus)、肺炎双球菌、炭疽杆菌、白喉杆菌、破伤风杆菌等；常见的革兰氏阴性菌有痢疾杆菌、伤寒杆菌、变形杆菌、及霍乱弧菌等。在治疗上，大多数革兰氏阳性菌都对青霉素敏感（结核杆菌对青霉素不敏感）；而革兰氏阴性菌则对青霉素不敏感（但奈瑟氏菌中的流行性脑膜炎双球菌和淋病双球菌对青霉素敏感），而对链霉素、氯霉素等敏感。所以首先区分病原菌是革兰氏阳性菌还是阴性菌，在选择抗生素方面意义重大。

  2. 细胞质膜，是包围细菌原生质的典型生物膜，由磷脂双分子与镶嵌蛋白质构成富有弹性的半透性膜。可以完成内质网、高尔基体和线粒体所承担的大部分工作。此外细菌细胞膜外侧有受体蛋白，参与细菌对周围环境的应答反应。

  3. 中膜体（mesosome)，又称间体或质膜体，由细胞膜内陷形成的囊泡状、管状或包层状膜机构，每个细胞内有一个或数个中膜体，在兰氏阳性菌中更明显。推测中膜体可能起DNA复制的支点作用。也有人认为中膜体含有细胞色素和琥珀酸脱氢酶，功能类似线粒体。

  4. 此外，某些细菌表面具有夹馍，是位于细胞壁表面的一层由葡萄糖与葡萄糖醛酸组成的松散的粘液状聚合物，也有的含多肽与脂质。荚膜具有一定程度的保护作用，如保护细胞免于干燥的影响，保护病原菌免受细胞的吞噬。荚膜本身还可作为细胞的营养物质，在营养缺乏时被细菌所利用。某些细胞具有鞭毛，作为运动器官。鞭毛的结构与真核生物的鞭毛完全不一样，是由一种称为鞭毛蛋白（flagellin)的弹性蛋白所构成，运动机理也不相同。

  2. 细菌细胞的核区与基因组：1） 细菌细胞只具有DNA聚集的核区，形状不规则，没有核膜，更没有核仁。核区主要由一个环状的DNA分子所组成，在高分辨率电镜下，可以看到核区是丝状结构，某些原核细胞的DNA为线性，而某些细菌，如霍乱孤菌（Vibrio Cholerae）含有不止一条DNA分子。人们习惯延用了真核细胞的染色体概念，也把细菌的核区DNA称为染色体，实际上它没有真正的染色体结构，但DNA也在RNA和拟核蛋白（不同于组蛋白）的协助下进行了高效包装：遗传信息量足够编码2000-5000种蛋白质，因此细菌DNA的空间构建是十分精巧的。2）细菌细胞没有核膜把核与细胞质绝对地分开，因此DNA复制、RNA转录与蛋白质合成的结构装置没有在空间上分隔，可以同时进行，这是细菌乃至整个原核细胞与真核细胞最显著的差异之一。电镜分子形态图可以显示，DNA分子边复制边转录，转录的mRNA在没有脱离DNA的状态下，又与核糖体结合翻译肽链。转录与翻译在时间与空间上是连续进行的。

  3. 细菌细胞核外DNA：除了核区存在DNA外，还存在可进行自主复制的质粒（plasmid），它们是裸露的环状DNA分子，所含遗传信息量为2-200个基因。质粒基因可以赋予细菌以新的性状。细菌可以失去质粒DNA而无妨于正常代谢活动。

  4. 细菌细胞的核糖体：每个细菌细胞含5000-50000个核糖体，充满于细胞中，少部分附着在细胞膜内侧，合成运输胞外的蛋白质或质膜蛋白。核糖体与mRNA形成多核糖体，是翻译肽链的结构。

  5. 细菌细胞内生孢子：很多G+细菌处于不利的环境或耗尽营养时，容易形成内生孢子，又称芽孢，是对不良环境有强抵抗力的休眠体。细菌细胞内的重要物质，特别是DNA，积聚在细胞的一端，在特殊结合蛋白的协助下形成一种含水量较丰富的致密体，外被很厚的壁。内生孢子折光性很强，不易染色，具有度过恶劣环境的能力，可以在杀死普通细菌或营养型细菌的条件下依然存活。

  6. 细菌细胞的增殖及其调控：

  1. 增殖的过程：分裂前，首先是DNA复制。复制始于复制起点，复制起点处的DNA复制完成后，可能依附于质膜上将来发生分裂的位置左右，继续完成DNA其余部分的复制。随着细胞的伸长，在一些蛋白质的协助下，复制完成的两个DNA分子分开，形成两个核区，细胞质膜在两个核区之间凹陷、延伸，将两个子细胞分隔开，最后形成新的细胞壁。抑制蛋白质的合成，两个DNA分子会停留于母细胞中央，无法完全分开。

  2. 增殖的调控：DnaA蛋白是复制起点（OriC）的结合蛋白，大约10个DnaA蛋白携带ATP结合于OriC，ATP的水解促使此处富含AT碱基对的区域解链，开启DNA复制。DNA复制开始后，复制起点随即发生甲基化，使得下一轮复制不会立即启动。复制完成后，细胞的分裂依赖于DNA复制完成的信号，DNA是否受到损伤以及两个DNA分子是否分离。FtsZ(filamenting temperature-sensitive mutant Z)是起始DNA分离的关键蛋白。FtsZ与真核细胞的管蛋白（tubulin）是同源物，在细菌DNA复制完成后，FtsZ蛋白聚集到将来细胞分开的位置，沿着质膜装配成为环状，成为Z环；随后Z环收缩，并招募与细胞壁形成有关的蛋白聚集于此，最终细胞分裂。

  （二）蓝藻细胞：蓝藻又称为蓝细菌(cyanobacteria)，是自养型原核生物，能进行与高等植物类似的光合作用。它们的光合作用系统中具有叶绿素a和光系统，以水为电子供体，放出O2，而其他光合细菌的电子供体一般是H2，H2S和S，不产生O2。蓝藻细胞内含有丰富的色素。体积比其他的原核细胞大得多，直径一般在1-10um，有的可达60um。虽然属于单细胞生物，但有些蓝藻经常以丝状、片状或中空球状的细胞群体存在，“发菜”就是蓝藻的丝状体，对固定沙漠有重要作用。

  1. 细胞结构：蓝藻细胞膜外有细胞壁和一层胶质的鞘。蓝藻的细胞壁与革兰氏阴性菌十分相似，肽聚糖层薄，外面包有外膜；所不同的是，细胞壁内层含有纤维素层。蓝藻的细胞质部分有很多同心环样的膜片层结构，称为类囊体（thylakoid），光合色素和电子传递链均位于此。类囊体膜上还有大量藻胆蛋白，负责将光能传递给叶绿素a。蓝藻细胞中央部分位于光镜下较周围原生质明亮，是遗传物质DNA所在部分，相当于细菌的核区，称为中心质或中央体。“中心质”经常不位于中央，与周围胞质无明确界限。蓝藻的DNA也几乎为裸露的，复制也可连续进行。与细菌的核区不同，中心质DNA的拷贝数在不同种类和不同个体变动很大，有些种类含有多个DNA拷贝，DNA的平均含量比高等动物还多。

  PS :类囊体分布在叶绿体基质和蓝藻细胞中[1] ，是单层膜围成的扁平小囊，也称为囊状结构薄膜。沿叶绿体的长轴平行排列。类囊体膜上含有光合色素和电子传递链组分，“光能向活跃的化学能的转化（光反应）”在此上进行，因此类囊体膜亦称光合膜。类囊体可增大叶绿体的膜面积，增大光合作用率。

  2. 细胞分裂：蓝藻细胞分裂时，细胞中部向内生长出新横膈壁，将中心质与原生质分为两半。一般情况下，两个子细胞在一个公共的胶质鞘包围下保持在一起，并不断分裂而形成丝状、片状等多细胞群体。除此之外，蓝藻还可以通过出芽、断裂和复分裂增殖。

  3. 异形胞：丝状蓝藻（如念珠藻与项圈藻）在氮源不足时，群体中5%-10%的细胞转化为异形胞（heterocyst）。异形胞个体大，细胞壁厚，并且丢弃了光系统2，合成固氮酶。固氮酶以光系统1制造的ATP为能量，将N2还原为NH3。固氮酶对O2敏感，异形胞的厚壁阻止了O2的侵入，光系统2的关闭阻断了O2的合成，而呼吸作用消耗了少量存在的O2，由此创造了一个严格厌氧环境。

  四、古核细胞（古细菌）

  P017: DNA序列越相似，亲缘关系也越近。因此，可以通过直系同源基因（orthologous gene）序列相似性的比较，确定物种间的进化关系。形态结构非常相似的原核生物并不是统一的类群，而是在极早的时候就演化为两大类：古细菌（archaeobacteria）与真细菌（eu-bacteria）。

  P018: 古细菌形态多样，具有细胞壁，染色为G+或G-；细胞大小在0.1 - 15um不等，分裂方式有二分分裂、出芽等多种。

  1. 古细菌的细胞壁：真细菌的壁主要是由含壁酸的肽聚糖构成，古细菌也有细胞壁，但没有胞壁酸和D-氨基酸，因此溶菌酶以及抑制肽聚糖前体合成的环丝氨酸、抑制肽聚糖合成的青霉素与万古霉素等对古细菌没有作用。

  2. 古细胞的质膜：由脂质与蛋白质构成，却与细菌和真核生物都不同：脂质由带有分支的C-H链末端以醚键，而不是酯键与甘油结合；膜脂中还有7%-30%为非极性脂质 - 鲨烯衍生物；极端耐热菌的质膜甚至是由C40四乙醚组成的单层膜。

  3. DNA与基因结构：遗传装置往往介于原核细胞和真核细胞之间。与细菌相似的地方有：DNA为环状、有操纵子结构、大部分基因无内含子、有多基因mRNA存在。另外一些特征与真核细胞类似，如DNA和组蛋白结合成类似核小体结构；tRNA和rRNA，甚至部分编码蛋白质的基因中有内含子，RNA聚合酶为复杂多聚体；翻译起始的氨基酸为Met（细菌是fMet）等。

  核糖体RNA (ribosomal RNAs，rRNAs) 约占RNA总量的 80%，它们与蛋白质结合构成核糖体的骨架。核糖体是蛋白质合成的场所，所以rRNAs的功能是作为核糖体的重要组成成分参与蛋白质的生物合成。rRNAs是细胞中含量最多的一类RNA，且分子量比较大，代谢都不活跃，种类仅有几种，原核生物中主要有5S rRNAs、16S rRNAs和23S rRNAs三种，真核生物中主要有5S rRNAs、5.8S rRNAs、18S rRNAs和28S rRNAs四种。

  信使RNA（messenger RNAs，mRNAs），约占RNA总量的5%。mRNAs是以DNA为模板合成的，又是蛋白质合成的模板。它是携带一个或几个基因信息到核糖体的核酸。由于每一种多肽都有一种相应的mRNAs，所以细胞内mRNAs是一类非常不均一的分子。但就每一种mRNAs的含量来说又十分低。这也解释了为什么mRNAs的发现比rRNAs与tRNAs要迟。

  转移RNAs (transfer RNAs，tRNAs) 约占RNA总量的15%。tRNAs的分子量在2.5×104左右，由70~90个核苷酸组成，因此它是最小的RNA分子。它的主要功能是在蛋白质生物合成过程中把mRNA的信息准确地翻译成蛋白质中氨基酸顺序的适配器（adapter）分子，具有转运氨基酸的作用，并以此氨基酸命名。此外，它在蛋白质生物合成的起始作用中，在DNA反转录合成中及其他代谢调节中也起重要作用。细胞内tRNA的种类很多，每一种氨基酸都有其相应的一种或几种tRNA。

  4. 核糖体：多数古细胞菌类的核糖体虽然也是70S，但含有60种以上的蛋白质，介于真核细胞与真细菌之间，而且其中的RNA与蛋白质的性质更接近于真核生物。古核生物细胞的形态结构与遗传结构装置和原核细胞相似，但有些分子进化特征更接近真核细胞。

  第三节 真核细胞

  包括大量单细胞原生生物，又包括全部多细胞生物（一切动植物、大部分真菌）。

  一、真核细胞的基本结构体系：在亚显微结构水平上，真核细胞可以划分为3大基本结构系统：1）以脂质及蛋白质成分为基础的生物膜结构系统；2）以核酸与蛋白质为主要成分的遗传信息传递与表达系统；3）由特异蛋白质装配构成的细胞骨架系统。这些由生物大分子构成的基本结构体系，尺度均为5-20nm，它们构成了细胞内部结构精密、分工明确、职能专一的各种细胞器，并以此为基础保证了细胞生命活动具有高度程序化与高度自控性。

  （一）生物膜系统：生物膜的厚度基本在8-10nm范围之内。细胞表面的细胞质膜及其相关结构，主要功能是进行选择性的物质跨膜运输与信号传导。细胞内部由双层核膜将细胞分成两大结构与功能区域 - 细胞质与细胞核，使得基因表达得以精密调控。在细胞质内以膜围绕形成很多重要的细胞器：线粒体与叶绿体是主要的供能与产能结构；内质网是生物分子合成的基地，脂质、糖类与很多蛋白质分子是在内质网表面合成并分选运输；高尔基体是对内质网上合成的物质进行加工、包装与运输的细胞器；溶酶体是细胞内的消化系统。生物膜还为生命的化学反应提供了表面，很多重要的酶定位在膜上，大部分生化反应在膜的表面进行。

  （二）遗传信息传递与表达系统：遗传信息的存储、传递与表达系统是由DNA、RNA和蛋白质组成的复合体。DNA与组蛋白质构成了染色质的基本结构 - 核小体（nucleosome），它们的直径为10nm；由核小体盘绕与折叠成紧密程度不同的常染色质与异染色质，在细胞分裂阶段又进一步包装形成染色体。染色质结构，连同DNA的修饰酶和转录因子等共同调控了基因的转录。核仁主要是转录rRNA与核糖体亚单位装配的场所。核糖体是由rRNA与数十种蛋白质构成的颗粒结构，其功能是将tRNA携带的氨基酸根据mRNA的指令连接成肽链。

  （三）细胞骨架系统：是由一系列特异的结构蛋白装配而成的网架系统，对细胞形态与内部结构的合理排布起支架作用。细胞骨架可分为胞质骨架与核骨架，实际上它们又是相互联系的。

  1. 胞质骨架主要由微丝、微管与中等纤维（也叫中间丝）等构成。微丝直径5-7nm，主要功能可能是信号传递与细胞运动；微管直径为24nm，其主要功能是细胞内物质的运输提供通道，以及形成有丝分裂的纺锤丝；中等纤维直径为10nm，分为多种类型，具有组织特异性，主要对细胞起支撑作用。

  2. 核骨架包括核纤层（nuclear lamina）与核基质（nuclear matrix）。核纤层的成分是核纤层蛋白（lamina），核基质的成分则颇为复杂。它们与基因表达、染色质构建与排布有关系。

  二、细胞的大小及其影响因素：细胞的大小有一定规律。一般而言，按细胞平均直径的粗略计算，支原体细胞比最小的病毒大10倍，细菌细胞比支原体大10倍，而多数动植物细胞大小约20-30um，比细菌大10多倍，一些原生动物细胞又比一般动植物细胞大10倍。

  P020: 对于高等动物，不论物种的差异多大，同一器官与组织的细胞，其大小总是在一个恒定的范围之内，这是由细胞作为生命基本单位的功能所决定的。合适的细胞体积能够保证细胞与周围环境进行正常的物质与信息交换，保证细胞内物质运输和信号传递的正常进行，对于细胞行驶正常的生物学功能至关重要。#

  碎碎念

  #生物的进化发展，是亿万级的筛选进程，所有得以以稳定状态生存的物种，其内部结构、构成机制、运行模式，一定是相对固化的整体构成(Paradigm)。所以在这个主干的基础上，任何分支都应该尊从主要原则（The First Principle），才有更大的机会生存下来和活得好！当然，异支或者盲支孕育着下一个Paradigm的Break-Out。

  P020: 细胞由各种生物分子和包括水在内的无机分子组成，细胞的大小，简单来说主要是由每个细胞内所含的蛋白质与核糖体RNA的量所决定的，其中蛋白质是更为主要的因素。糖类、脂质和DNA、mRNA以及tRNA等有机分子在细胞体积上所占权重很小，而无机盐的量对细胞大小更无足轻重。水虽然占到细胞湿重的80%以上，但细胞内水分的量是由细胞内所含有机生物分子的量所决定，水本身并不直接决定细胞的大小（成熟的植物细胞是个例外，它们的大小主要由中央液泡决定）。因此，细胞的尺寸可以说取决于核糖体的活性，因为蛋白质的量由核糖体来决定。

  P020: 调控细胞大小的网络中心是一个叫做mTOR(mammalian target of rapamycin)的蛋白激酶，因其能被雷帕霉素（rapamysin)抑制而得名。该蛋白质的失活会导致细胞体积变小。

  三、原核细胞与真核细胞的比较

  1. 细胞膜系统的分化与演变：真核细胞以膜系统的分化为基础，首先分化为两个独立的部分 - 细胞核与细胞质，细胞质内又以膜系统为基础分隔为结构更精细、功能更专一的单位 - 各种重要的细胞器。

  2. 遗传信息量与遗传装置的扩增与复杂化。建立在细胞内膜系统分化基础上的内部结构与功能的区域化与专业化，是细胞进化过程中的一次重大飞跃，导致了遗传装置的扩增与基因表达方式的相应变化。

  1. 真核细胞的基因组一般远大于原核细胞的，作为遗传信息载体的DNA也由原核细胞的环状单倍性变为线状多倍性；基因数量大大增加，由几千个发展到2万-3万个；细胞核的存在，使真核细胞基因表达实现了多层次调控，远比原核生物精细与复杂，为完成复杂的生命活动提供了基础。

  2. 原核细胞基因表达的调控主要以操纵子的形式进行，难以完成细胞的复杂分化；而另一方面，原核细胞的这种简单的调控方式能适应多种不利环境#

  碎碎念

  #简单=生存

  3. 真核生物除了编码基因外，还有不编码任何蛋白质或RNA的基因间隔序列和内含子，其比例占整个基因组的90%以上。内含子的出现，使同一个RNA可以通过可变拼接，翻译出多种不同的蛋白质。#

  碎碎念

  #不适合人体生存的遗传基因编码，在分裂过程中被筛选掉。

  P022：真核细胞拥有多条DNA分子，并且DNA与蛋白质形成交替存在的染色质和染色体等高级结构形式，加之核膜的存在以及真核细胞内部结构的庞大与复杂性，给遗传物质的准确复制与均等无误地分配到子细胞增加了“难度”。真核细胞发展出一整套由酶和调控蛋白组成的复杂精密的体系，严格调控细胞增殖。真核细胞的细胞周期可以明显地划分为细胞间期与细胞分裂期，整个间期可看做是细胞增殖所需要物质的合成期，DNA复制仅限于S期，为了准确无误地将遗传物质分配给两个子细胞，真核细胞分裂时，核膜崩解消失，染色质转变为紧密包装的染色体，并借助有丝分裂器（纺锤体）的牵拉而均等分配给子细胞。真核细胞的分裂因出现纺锤丝而称为有丝分裂或间接分裂。原核细胞的增殖没有严格阶段，也没有染色质与染色体结构的交替，更无纺锤体的出现，所以将原核细胞的分裂叫做无丝分裂或直接分裂。

  四、植物细胞与动物细胞的比较：构成动物体与植物体均有基本相同的结构体系与功能体系，大部分的重要的细胞器与细胞结构都相同。另一方面，植物细胞有一些特有的细胞结构与细胞器是动物细胞所没有的，如细胞壁、液泡、叶绿体及其他质体，也有一些动物细胞的结构，如中心粒，是植物细胞内不常见到的。下面是植物细胞所特有的结构：

  （一）细胞壁：在细胞分裂过程中由原生质体分泌形成的。分裂后期，残留的纺锤体微管在细胞赤道板中央聚集为圆柱形的成膜体（phragmoplast），中间围有高尔基体和内质网囊泡。这些囊泡彼此融合，形成膜质平板 - 细胞板（cell plate)。囊泡中富含多糖，形成细胞板后，多糖用来制造初生壁（1-3um)和果胶质的胞间层。随着囊泡的加入，细胞板不断向外延伸，最终与质膜融合，新生细胞也和原来的细胞壁连接起来。细胞壁的主要成分是纤维素，还有果胶质、半纤维素与木质素等。植物细胞壁产生了地球上最多的天然聚合物；木材、麻与棉的纤维。

  （二）液泡：是由单层脂蛋白膜包围的封闭系统，内部是水溶液，溶有盐、糖、氨基酸、生物碱与色素等物质，溶液的浓度可以达到很高的程度。液泡是植物细胞的代谢库，起调节细胞内环境的作用。液泡中还有水解酶，能够破坏衰老的细胞器，起着类似溶酶体的功能。此外液泡的膨压对维持幼嫩植物组织的刚性有重要作用。植物缺水时发蔫，就是液泡膨压下降的结果。

  （三）叶绿体：最重要、最普遍的质体，她是进行光合作用的细胞器。叶绿体利用其叶绿素将光能转变为化学能，把CO2与水转变为糖，是世界上成本最低，创造物质财富最多的“生物工厂”。

  第四节 非细胞形态的生命体 - 病毒

  病毒是非细胞形态的生命体，是迄今为止发现的最小，最简单的有机体。

  一、病毒的基本知识

  P023: 病毒与细胞的区别主要表现在以下几个方面：

  1. 病毒很小，结构极其简单。绝大部分病毒的大小只有20-200nm，可以通过细菌滤器。

  2. 遗传载体的多样性。所有细胞中，都含有DNA与RNA。并以双链DNA分子作为遗传物质的载体。然而，不同种类的病毒却显现出其遗传载体的多样性：不仅有DNA病毒，还有RNA病毒。这两种病毒均有双链和单链之分。但每一种病毒粒子中只含有DNA或RNA，而非两者兼有。

  3. 彻底的寄生性。病毒虽然具备了生命活动的最基本特征（增殖与遗传），但只是一类不“完全”的生命体。病毒自身没有独立的代谢与能量转化系统，必须利用宿主细胞结构、“原料”、能量与酶系统进行繁殖。因此，有人称之为分子水平上的寄生。

  4. 病毒是以复制和装配的方式进行繁殖。增殖过程，如同生产汽车，在细胞这个生产病毒的工厂中，首先合成大量的病毒核酸以及各种病毒蛋白，然后由这些“部件”装配成新的子代病毒。因此，一般把病毒的增殖称为复制，而细胞只能以分裂的方式增殖。

  目前发现的病毒主要的形式有：

  1. 真病毒(envirus)：绝大多数病毒是由核酸与蛋白质构成的核酸 - 蛋白质复合体；

  2. 亚病毒(subvirus)：是一类比病毒更为简单，仅具有某种核酸不具有蛋白质，或仅具有蛋白质而不具有核酸，能够侵染动植物的微小病原体。不具有完整的病毒结构的一类病毒称之为亚病毒，包括类病毒(viroid)、拟病毒（viroid-like）、朊病毒(prion).

  P024: 1982年Stanley B. Prisiner从患有羊瘙痒病的羊体中，分离出一种蛋白感染因子，命名为prion(pr意为protein, i意为infectious, on意为因子）。因为这是一类具有感染性的蛋白质，故有人译为阮病毒。但它与前面所提到的两类病毒的根本区别在于，阮病毒不是入侵者，而仅仅是机体自身某一种蛋白质的构象改变所致，其一级结构即蛋白的氨基酸序列与正常蛋白相同。但prion可使正常蛋白的构象发生改变，成为prion，从这个意义上讲，prion具有复制能力和感染性，但与病毒的复制机理和感染方式完全不同。因此，有人认为将prion译为“阮粒”更为合适。从酵母菌到人体均发现阮粒的存在，它能够侵染哺乳动物的神经组织，引起羊瘙痒病，牛海绵状脑炎（又称疯牛病），人类克-雅氏症等慢性神经系统退行性疾病的发生。目前已证明，上述疾病均与一种在神经细胞质膜上含量较高的膜蛋白PrP(Prion Protein)构象发生改变相关。众所周知，食用患疯牛病牛肉的人，有可能被阮粒感染。输血也可以导致阮粒在人群中的传播。由于在prion研究中的贡献，于1997年获诺贝尔生理学或医学奖(Nobel Prize in Physiology or Medicine)。

  病毒的分类：

  1. 病毒按照感染的宿主范围，可以分为：1）动物病毒；2）植物病毒；3）细菌病毒（噬菌体）等。

  2. 病毒按照核酸类型的不同，可以分为DNA病毒与RNA病毒两大类。DNA病毒又可分为双链DNA与单链DNA病毒；而RNA病毒也可分为单链RNA与双链RNA病毒。在单链RNA病毒中又有正链RNA病毒和负链RNA病毒之分。前者的病毒基因组RNA如同细胞中的mRNA，可直接作为模版，指导病毒蛋白质的合成。而负链RNA病毒侵染细胞后，必须以其基因组RNA为模版，在自身携带的RNA聚合酶的作用下合成mRNA，进而翻译病毒的蛋白。

  3. 病毒按照核壳体的形态，分为立体对称与螺旋对称两种基本类型。立体对称型病毒的核衣壳呈正20面体，每一个面又呈三角形，核酸折叠在衣壳之内。螺旋对称性病毒是核酸与衣壳的衣粒按特殊的方式结合在一起形成核壳体，都具有囊膜。（凡是有囊膜的病毒对有机溶液剂都很敏感，在有机溶剂作用下易灭活）。

  二、病毒在细胞内增殖：增殖过程首先是病毒识别并侵入宿主细胞，病毒“篡夺”了细胞DNA对代谢过程的“指导”作用，利用宿主细胞的全套代谢机构，以病毒核酸为模版，进行病毒核酸的复制与转录，并翻译病毒蛋白质，进而装配成新一代的病毒颗粒，最后从细胞中释放出来，再感染其他的细胞，开始下一轮的周期。结构完整的，并具有感染性的病毒称为病毒粒子或成熟病毒（virion)。过程简单叙述如下：

  1. 病毒识别和侵入细胞: 1）相吸：病毒表面的蛋白质与细胞表面特异受体的相互作用，病毒与细胞发生特异性的吸附；2）进入：动物病毒进入细胞主要有两种方式：一是细胞以主动“胞饮”的方式使病毒进入细胞，如腺病毒。二是某些有囊膜的病毒，通过囊膜与细胞质膜融合的方式进入细胞，如HIV，或通过胞饮作用进入细胞，然后再与胞饮囊泡的膜融合进入细胞质中，如流感病毒、幸德毕斯病毒等。噬菌体侵染细菌时，仅将其核酸注入细胞，衣壳则留在细菌的细胞壁外。植物病毒难以穿越坚韧的细胞壁，常常借助于昆虫进食过程侵染植物细胞。3）复制与转录：病毒进入细胞后，在细胞内的蛋白水解酶的作用下，衣壳被裂解，释放出病毒的核酸。除反转录病毒外，RNA病毒的核酸一般是在胞质内复制与转录的。多数DNA的病毒的核酸则转移到核内进行复制与转录。但是最大的一类病毒如痘病毒（poxvirus）却在细胞质中繁殖。

  2. 病毒核酸的复制、转录与蛋白质的合成：病毒的核酸类型大致可分为7种基本类型：双链DNA、单链DNA、双链RNA、单链RNA（包括侵染性RNA病毒／正链RNA病毒，非侵染性RNA病毒／负链RNA病毒）、病毒粒子中携带反转录酶的单链RNA、复制过程中涉及反转录的部分双链DNA病毒。

  P028: 反转录病毒：复制过程非常独特。首先以病毒RNA分子为模板，在病毒自身所携带反转录酶的作用下，合成病毒的DNA分子。随后病毒DNA整合到宿主细胞染色质的DNA链上。进而，以整合在细胞DNA上的病毒DNA片段为模板，合成新的病毒基因组RNA与病毒mRNA，后者与核糖体结合，翻译出各种病毒蛋白，其中包括病毒的反转录酶。最后，装配产生新的子代病毒。在上述过程中，有可能导致细胞发生转型，成为肿瘤细胞。由RNA为模板，通过反转录合成DNA是在研究肿瘤RNA病毒与宿主细胞相互作用时所取得的一项重大发现。David Baltimore等也因此于1975年荣获诺贝尔生理学或医学奖。

  3. 病毒的装配、成熟与释放：1）无囊膜的病毒，当其核酸与蛋白质装配成核壳体后，就成为具有感染性的完整病毒粒子。对这些病毒来说，装配的过程就是成熟的过程；对于有囊膜的病毒，当其核酸与衣壳蛋白装配成核壳体后，还需要以出芽的方式包上囊膜而发育成成熟的子代病毒，囊膜实际上是嵌有病毒囊膜蛋白的特化的细胞膜。许多无囊膜的动物病毒，如腺病毒、小RNA病毒等，当病毒释放时，常常引起细胞的崩解，所以释放的速度往往很快。有囊膜的病毒多以出芽的方式释放，一般病毒是逐步向细胞外释放的。2）从病毒侵入细胞到子代病毒的成熟释放称为一个增殖周期（或复制周期），不同的病毒的增殖周期长短不一。有感染性的病毒粒子常常只占其中较少的一部分。3）病毒在细胞内的增殖过程是病毒与细胞相互作用的极为复杂的过程，也是宿主细胞结构功能进行重大改组的过程，绝大多数病毒在体外培养的细胞复制时，可以在显微镜下见到宿主细胞发生了明显的形态上的变化，称细胞病变（cytopathic effect, CPE），也有少数病毒（如猪瘟病毒），虽在细胞内复制装配并释放，但并不见细胞明显的变化，甚至细胞可以带毒分裂繁殖。当病毒侵入子代病毒时，首先要关闭或改变细胞的基因表达调控系统，“篡夺”细胞DNA的指导作用，同时改装宿主细胞的结构与代谢“机器”，以适应病毒的复制。因此被感染的细胞，必然要发生一系列重大结构的变化，甚至发生细胞凋亡现象。

  三、病毒与细胞在起源与进化中的关系：以进化论的观点，目前主要有三种观点：

  1. 生物大分子 —》病毒 —》细胞

  2. 生物大分子 —》病毒 & 细胞

  3. 生物大分子 —》细胞 —》病毒

  目前第二与第三种观点比较容易接受。原因是以目前的科学技术手段，尚不能发现病毒的化石。

  第三章 细胞生物学研究方法

  凡是用来解决细胞生物学问题所采用的方法都应属于细胞生物学研究方法。包括光学显微镜、电子显微镜、分子生物学技术等。

  第一节 细胞形态结构的观察方法

  肉眼的分辨率一般只有0.2mm；光学显微镜的分辨率达到0.2um，借此发现了细胞；电子显微镜分辨率高达0.2nm，将细胞的超微结构展现在人们面前。它们的成像原理，仪器构造以及使用和操作方法等方面，几乎没有任何共同之处。

  一、光学显微镜

  (一）普通复式光学显微镜

  P031: 光学显微镜由3部分组成：1）光学放大系统，为两组玻璃透镜：目镜与物镜；2）照明系统：包括光源和聚光镜，有时另加各种滤光片以控制光的波长范围；3）镜架及样品调节系统。

  P031: 显微镜最重要的性能参数是分辨率（resolution），而不是放大倍数。分辨率是指能区分开两个质点间的最小距离。光学显微镜可以直接用于观察单细胞生物或体外培养细胞。如果观察生物组织样品，则通常需要对多观察的材料进行固定和包埋，再将包埋好的样品切成厚度约5um的切片，最后进行染色。

  （二）相差显微镜和微分干涉显微镜

  P031：活细胞显微结构的细节可以借助相差显微镜（phase-contrast microscope）来观察。光波的基本属性包括波长、频率、振幅和相位等。

  P032: 光线通过不同密度的物质时，其滞留程度也不同。密度大则光的滞留时间长，密度小则光的滞留时间短，因而，其光程或相位发生了不同程度的改变。相差显微镜是在普通光学显微镜的基础上，添加两个元件，即“环状光阑”和物镜后焦上的“相差板”，从而可将这种光程差或相位差，通过光的干涉作用，转化成振幅差，因此，可以分辨出细胞中密度不同的各个区域。

  P032: 微分干涉显微镜是以平面偏振光为光源。光线经棱镜折射后分成两束，在不同时间经过样品的相邻部位，然后再经过另一棱镜将这两束光聚合，从而使样品中厚度上的微小区别转化成明暗区别。微分干涉显微镜更适合研究活细胞#

  碎碎念

  #应该说，以目前的手段吧。

  （三）荧光显微镜

  P032: 是在光镜水平上，对细胞内特异的蛋白质、核酸、糖类、脂质以及某些离子等组成进行定性定位研究的有力工具。荧光显微镜样品制备技术包括免疫荧光技术和荧光素直接标记技术。荧光染料DAPI特异性地直接与细胞中的DNA相结合，从而显示出细胞核或染色体在细胞中的定位。这是一种常用的直接标记技术。

  （四）激光扫描共焦显微镜：分辨率可以比普通荧光显微镜的分辨率提高1.4 - 1.7倍。其纵向分辨率（axial resolution）也得到很大的改善。在研究亚细胞结构与组分的定位及动态变化等方面的应用越来越广泛，其中包括荧光共振能量转移技术、荧光漂白恢复技术以及单分子成像技术等。

  二、电子显微镜：受到光波波长的限制，光镜的分辨率难以得到进一步提高。只有借助分辨率更高的电子显微镜（electron microscope，EM，简称电镜），才可能观察到细胞内部的精细结构。

  （一）电子显微镜的基本知识

  1. 电子显微镜与光学显微镜的基本区别：高分辨率主要是因为使用了波长比可见光短得多的电子束作为光源，波长一般小于0.1nm。光源的差异决定了电镜与光镜的一系列不同点：比如电镜需要通过电磁透镜聚焦；电镜镜筒中要求高度真空；图像需要通过荧光屏或感光胶片进行显示和记录等。

  2. 电子显微镜的分辨本领与有效放大倍数：电镜的分辨率可达0.2nm，其放大倍数为10的6次方。此放大倍数称之为有效放大倍数。如果通过光学手段继续放大，再也不会得到任何有意义的信息，因此称之为“空放大”。在现实操作中，电镜的实际分辨率常常受到生物制样技术本身的限制。

  3. 电子显微镜的基本构造：1）电子束照明系统（电子枪和聚光镜）；2）成像系统（物镜、中间镜与投影镜等）；3）真空系统（用两级真空泵不断抽气，保持电子枪、镜筒及纪录系统内的高度真空，以利于电子的运动；4）记录系统

  （二）主要电镜制样技术

  1. 超薄切片技术：由于电子束的穿透能力有限，为获得较高分辨率，切片厚度一般仅为40-50nm，即一个直径为20um的细胞可切成几百片，故称为超薄切片（ultra thin section）。采取的步骤如下：1）固定：利用高锰酸钾、戊二醛和四氧化鋨（OsO4，常称为鋨酸）；动物的处死和取材都要快速进行，并通常在低温下进行，以免细胞自溶作用造成的伤害。固定的样品块直径一般小于1mm，以便固定剂迅速渗透。2）包埋：包埋介质需要具有良好的机械性能以利于切片；在聚合过程中，不发生明显的膨胀和收缩；观察样品时，易被电子穿透并能耐受的电子轰击；在高倍放大的图像中不显示本身结构等特性。目前常用的包埋剂是各种环氧树脂。由于生物样品固定后含有大量水分，而包埋剂多具有疏水性质。因此固定的样品在包埋前通常要经过一系列的脱水处理。3）切片：切片厚度通常是40-50nm。4）染色：电镜样品用重金属进行染色。当电子束穿过样品时，样品中的金属离子不同程度地散射和吸收电子，在样品上形成明暗差别。因此，电镜下观察到图像只能为黑白图像。

  2. 负染色技术：负染色是用重金属盐，如磷钨酸或醋酸双氧铀溶液对铺展在载网上的样品进行染色。吸去多余染料，样品自然干燥后，整个载网上都铺上了一薄层重金属盐，从而衬托出样品的精细结构。

  3. 冷冻蚀刻技术：（freeze etching）的样品制备过程包括冰冻断裂与蚀刻复型两步，因此又称冰冻断裂 - 蚀刻复型技术。冰冻蚀刻技术主要用来观察膜断裂面上的蛋白质颗粒和膜表面形貌特征，图像富有立体感，样品不需包埋甚至也不需要固定。

  4. 电镜三维重构与低温电镜技术：生物大分子的三维结构是当今生命科学研究中的核心课题之一。电镜三维重构技术是电子显微术、电子衍射与计算机图像处理相结合而形成的具有重要应用前景的一门新技术。#

  碎碎念

  #The Nobel Prize in Chemistry 2017 was awarded to Jacques Dubochet, Joachim Frank and Richard Henderson "for developing cryo-electron microscopy（低温冷冻电子显微术） for the high-resolution structure determination of biomolecules in solution"

  5. 扫描电镜技术：扫描电镜（scanning electron microscope, SEM）问世于20世纪60年代。其电子枪发射出的电子束被磁透镜汇聚成极细的电子“探针”，在样品表面进行“扫描”，激发样品表面放出二次电子，二次电子再由探测器收集。扫描电镜景深长，成像具有强烈的立体感，分辨率可达0.7nm，可用于观察核孔复合体等更精细的结构。

  三、扫描隧道显微镜：（scanning tunnel microscope, STM）是IBM苏黎世实验室的G. Binning和H. Rohrer等于1981年发明的，它是一种探测微观世界物质表面形貌的仪器。此项发明获得1986年的诺贝尔物理学奖。STM的主要原理是利用量子力学中的隧道效应，即通常在低电压下，二电级之间具有很大的阻抗，阻止电流通过，称之为势垒。当二电级之间近到一定距离（100nm之内）时，电极之间产生了电流，称隧道电流；这种现象称隧道效应。STM的主要装置包括实现x、y、z3个方向扫描的压电陶瓷，逼近装置、电子学反馈控制系统和数据采集、处理、显示系统。

  P038: STM的主要特点有：1）具有原子尺度的高分辨本领，侧分辨率为0.1 - 0.2nm，纵分辨率可达0.001nm；2）可以在真空、大气、液体（接近于生理环境的离子强度）等多种条件下工作，这一点甾生物学领域的研究中尤其重要；3）非破坏性测量。因为扫描时不接触样品，又没有高能电子束的轰击，基本可以避免样品的形变。目前，STM作为一种新技术，已被广泛应用于生命科学各研究领域。人们已用STM直接观察到DNA、RNA和蛋白质等生物大分子及生物膜、病毒等结构。与其功能类似的还有原子力显微镜（atomic force microscope）。

  第二节 细胞及其组分的分析方法

  形态学观察与细胞组分分析相结合是当代细胞生物学研究中常常采用的试验方法。

  一、用超离心技术分离细胞组分：用低渗勻浆、超声破碎或研磨等方法可使细胞质膜破损，形成细胞核、线粒体、叶绿体、内质网、高尔基体、溶酶体等细胞器和细胞组分组成的混合勻浆，再通过差速离心，即利用不同的离心速度所产生的不同离心力，将各种质量和密度不同的亚细胞组分和各种颗粒分开。超速离心机可达转速1x10的5次方R/Min，产生60万倍重力场。常用的介质有蔗糖和氯化铯等。

  二、细胞成分的细胞化学显示方法：为了测定蛋白质、核酸、多糖和脂质等细胞组分，通常利用一些显色剂与所检测物质中一些特殊基团特异性结合的特性，通过显色剂在细胞中的定位及颜色的深浅来判断某种物质在细胞中的分布和相对含量。由于大多数固定剂对酶都有失活或称钝化作用，所以，在进行细胞中某种酶的定性研究时，样品制备常采用冰冻切片，或以冷丙酮、甲醛进行短时间固定，以尽量保持酶的活性，然后将样品（细胞或组织切片）与适宜底物共同温育。

  三、特异蛋白抗原的定位与定性：20世纪70年代以来，免疫学的迅速发展为细胞生物学的研究提供了强有力的手段，特别是在细胞内特异蛋白的定位与定性方面，单克隆抗体与其他一些检测手段相结合发挥了重要作用。免疫荧光与免疫电镜是最常见的研究细胞内蛋白质分子定位的重要技术。

  （一）免疫荧光技术：所谓免疫荧光技术就是指免疫学方法（抗原 - 抗体特异结合）与荧光标记技术相结合用于研究特异蛋白抗原在细胞内分布的方法，它包括直接和间接免疫荧光技术两种。

  （二）免疫电镜技术：免疫荧光技术快速、灵敏、特异性强，但其分辨率有限。免疫电镜技术则能有效地提高样品的分辨率，在超微结构水平上研究特异蛋白抗原的定位。免疫电镜技术可分为免疫铁蛋白技术（已过时）、免疫酶标技术与免疫胶体金技术。

  四、细胞内特异核酸的定位与定性：特异核酸指的是DNA或RNA的定位与定性的研究。通常采用原位杂交(in situ hybridization)技术。用标记的核酸探针通过分子杂交确定特异核苷酸序列在染色体上或在细胞中的位置的方法称为原味杂交。

  五、定量细胞化学分析与细胞分选技术

  第三节 细胞培养与细胞工程

  一、细胞培养：细胞培养是当前细胞生物学乃至整个生命科学研究与生物工程中最基本的实验技术。干细胞生物学的发展及其应用在很大程度上基于细胞培养技术的发展。细胞培养包括原核生物细胞、真核单细胞、植物细胞与动物细胞的培养以及与此密切相关的病毒的培养。

  （一）动物细胞培养：体外培养的动物细胞可分为原代细胞（primary culture cell）与传代细胞（subculture cell）。原代细胞是指从机体取出后立即培养的细胞，进行传代培养后的细胞即称为传代细胞。也有人把传至10代以内的细胞统称为原代细胞培养。

  P043:

  细胞系（cell line）：可传代40-50次的细胞。

  有限细胞系（finite cell line）：50代以后死光光的传代细胞。

  永生细胞系（infinite cell line）或称连续细胞系（continuous cell line）：传代细胞发生了遗传突变，并使其带有癌细胞的特点，有可能在培养条件下无限制地传代培养下去。

  （二）植物细胞的培养：1）单倍体植物细胞培养，应用于植物育种；2）原生质体培养，转基因植物细胞的培养与分化的研究是植物基因工程的基础。

  二、细胞工程：细胞工程是生物工程的重要领域之一。细胞工程所涉及的主要技术包括细胞培养、细胞分化的定向诱导，细胞融合和显微注射等。通过细胞融合技术发展起来的单克隆抗体技术已取得了重大成就。细胞工程与基因工程结合，前景尤为广阔。

  （一）细胞融合与单克隆抗体技术：两个或多个细胞融合成一个双核或多核细胞的现象称为细胞融合（cell fusion）。细胞融合可以在基因型相同的细胞间进行，也可在基因型不同的种内细胞间甚至种间细胞间进行。基因型相同的细胞形成的融合细胞称为同核体（homokaryon）；基因型不同的细胞形成的融合细胞称为异核体（heterokaryon）。含有两个核的同核体可通过同步有丝分裂产生含有异常核的单核子细胞，其染色体数为正常数目的两倍，这些染色体是从原来两个核承袭而来的。通过细胞杂交形成的单核子细胞称为合核体（synkaryon）。单克隆抗体技术最主要的优点是可以用混合性的异质抗原制备出针对某单一性抗原分子上特异决定族的同质性单克隆抗体。单克隆抗体与基因克隆技术相结合为 分离和鉴定新的蛋白质和基因开辟了一条广阔途径。而且在临床诊断与肿瘤等疾病的治疗中也具有重要作用。

  （二）显微操作技术与动物的克隆：

  P044: 所谓细胞拆分就是把细胞核与细胞质分离开来，然后把不同来源的胞质体（cytoplast）和核体（karyoplast）相互组合，形成核质杂交细胞。

  P044: 细胞拆分可以分为物理法和化学法两种类型。

  物理法:就是用机械方法或短波光把细胞核去掉或使之失活，然后用微吸管吸取其他细胞的核，注入去核的细胞质中，组成新的杂交细胞。

  化学法: 是用细胞松弛素B（cytochalasin B）处理细胞，细胞出现排核现象，再结合离心技术，将细胞拆分为核体和胞质体两部分。

  显微操作（micromanipulation）技术：即在显微镜下，用显微操作装置对细胞进行解剖和微量注射(microinjection)的技术。

  细胞拆分、显微注射与现代分子生物学技术相结合使这些经典的胚胎学技术展现出极大的潜力，它不仅成为核质关系、细胞内某种mRNA或蛋白质功能等基础研究的重要手段，而且在转基因动物、高等动物的克隆方面的理论与实践研究中取得了重大的突破。

  第四节 细胞及生物大分子的动态变化

  一、荧光漂白恢复技术：（fluorescence photobleaching recovery, FPR）技术是使用亲脂性或亲水性的荧光分子，如荧光素、绿色荧光蛋白等与蛋白或脂质偶联，用于检测所标记分子在活体细胞表面或细胞内部的运动及其迁移速率。

  二、单分子技术与细胞生命活动的研究：可以在纳米空间尺度和毫秒时间尺度上精确测量单分子的距离、位置、指向、分布、结构以及各种动态过程。优点是：实时直接观测单个分子的反应动力学路径，测量单一分子及分子间相互作用，捕捉单分子随机过程和分子构象变化的中间态，测量稀发但重要的信号和分布，测量非平衡态和不同步的体系等。

  三、酵母双杂交技术（yeast two-hybrid system）是一种利用单细胞真核生物酵母在体内分析蛋白质 - 蛋白质相互作用的系统。

  四、荧光共振能量转移技术：（fluorescence resonance energy transfer, FRET）。用来检测活体细胞内两种蛋白质分子是否直接相互作用的重要手段。其基本原理是：在一定波长的激发光照射下，只有携带发光基团A的供体分子可被激发波长为 A的荧光，而同一激发光不能激发携带发光基团B的受体分子翻出波长为B的荧光。然而，当供体所发出的荧光光谱A与受体上的发光基团之间的距离小到一定程度时，就会发生不同程度的能量转移，即受体分子的发光基团吸收了供体所发出的荧光，结构受体分子放出了波长为B的荧光，这种现象称为FRET现象。

  五、放射自显影技术：是利用放射性同位素的电离射线对乳胶（含AgBr或AgC1)的感光作用，对细胞内生物大分子进行定性、定位与半定量研究的一种细胞化学技术。根据研究对象的需求，分为光镜（显微）放射自显影和电镜放射自显影技术。

  第五节 模式生物与功能基因组的研究

  虽然显微技术的不断发展，不断开拓着人类了解细胞结构的视野，但是对于其成分的了解，特别是数以万计的基因及其表达产物的功能，以及它们在细胞代谢与细胞生长、分化、衰老、凋亡等生命活动的协同作用与调节机制，则更多地需要通过各种“模式生物”，借助于生物化学与分子生物学的技术手段，综合当今迅速发展的功能基因组学（functional genomics）、蛋白质组学（proteomics）以及生物信息学（bioinformatics），进行研究。

  一、细胞生物学研究常用的模式生物：

  P048: 大肠杆菌与操纵子学说的建立及现代分子生物学的发展，豌豆和果蝇与遗传学定律的发现，酵母和海胆与对细胞周期调控机制的认识，线虫与对细胞凋亡机制的揭示，小鼠与对哺乳动物功能基因组学的研究等等。由于基因在进化上的保守性以及遗传密码的通用性，从一种实验生物得到的有关基因性质或功能方面的信息往往也适用于其他生物。

  二、突变体制备技术：主要应用于人类功能基因组提供资料。

  制备突变体的方法主要从DNA与RNA两个层次进行。

  RNA水平上：主要是RNA干扰的方法，这里包括瞬时的与永久的干扰。如RNAi方法。

  DNA水平上：也叫基因敲除（knock out）。以果蝇为例，目前通常的制备方法有三种：化学诱变法、P因子介导的突变和基于同源重组的定点突变。

  正向遗传学方法（forward genetics）：化学诱变法、P因子介导

  反向遗传学方法（reverse genetics）：同源重组的定点突变、RNAi方法

  基因组按其重要性大体可分为两类：致死基因（essential gene，突变后机体不能存活）与非致死基因（non-essential gene，突变后机体可以存活，只是存在部分缺陷，包括可见的与不可见的，或没有缺陷）。体细胞克隆（somatic clones）技术可以用来研究那些突变后致死的基因功能。

  后基因时代（post genomic era）的生命科学工作者的任务早已不是寻找新的基因，而是在全基因组水平研究基因的功能，最终完成对全部基因组功能的诠释，也就是细胞生命活动的机制的认识。为此，科学家们正在整合所有信息，建立各种各样的文库；如突变体库、基因表达模式库、各种蛋白组学库、非编码RNA文库等等。其中，突变体库对基因组功能的诠释将会发挥至关重要的作用（此处大写不懂？）。

  三、蛋白质组学技术：一般来说，基因是生物体遗传信息的载体，而蛋白质是各种复杂生理功能的具体执行者。对生命活动的认识最终依赖于对细胞内各种蛋白质功能及其相互协同作用的了解。1994年，M. Wilkins与K. Williams等第一次提出了蛋白质组（proteome）概念。是由蛋白质（protein）与基因组（genome）两个词组合而成，意指“一种基因组所表达的全部蛋白质”。蛋白质组学（proteomics）是全面研究细胞、组织乃至整个生命体内蛋白质组成及其活动规律的科学。采用大规模、高通量、高速度的技术手段，通过全局性研究基因组所表达的所有蛋白质在不同时间与空间的表达谱和功能谱，全景式地揭示生命活动的本质。蛋白质组学技术主要包括蛋白质分离技术（双向凝胶电泳、多为液相色谱、毛细管电色谱等）和蛋白质鉴定技术（如质谱、蛋白质芯片技术等）。同时，生物信息学技术也是蛋白质组学研究技术中不可或缺的重要部分。

  第四章 细胞质膜(Plasma Membrane)

  细胞质膜(plasma membrane) 曾称细胞膜（cell membrane）是指包围在细胞表面的一层极薄的膜，主要由膜脂和膜蛋白和糖类所组成的生物膜。细胞质膜的基本作用是维护细胞内微

• 《精神分析治疗：实践指导》书摘

  作者：Carrie Lin 发布时间：2016-08-23 21:02:46

  心理治疗作为一种职业，它产生于这样一种时代背景：生活以某些特定的方式变得艰难。举例来说，直到工业革命在生理成熟的年龄和能在社会上承担起成年人的角色的年龄之间制造出一道鸿沟之前，并不需要帮助那些处在青春期的有困扰的年轻人。也不存在帮助那些具有“认同”问题的个体的需要，直到在快速的社会变化、技术革命、消费主义以及大众传媒的发展等背景下，人们定义自我的可能性被成倍地扩展时，这类问题才出现。

  中国正处于古老和全新之间的一个迷人的位置上。在中国更为传统的亚文化里工作的治疗师们告诉我，他们必须比在美国治疗师通常所做的更有弹性，更为明显地表达温暖和友好，更尊重传统宗法习俗，并且更愿意表现出权威性。这些治疗特征和其他一些可能会在不同设置之间变化的因素（如治疗师的语音语调、治疗框架、建立治疗联盟的方式）都很重要，但本质上是可因地制宜的；它们取决于病人与治疗师双方关于怎样的处理能推动治疗过程向前发展的感觉。在精神分析治疗里，根本的、不随情境变化的因素则包括对意义的寻求、对诚实的承诺，以及对病人独特主观体验的深深尊重。

  心理学可能是一门科学，但心理治疗却是一门艺术。在过去的一个世纪中，心理动力性治疗最初始于治愈严重癔症病人难以理解的症状的努力，之后它渐趋精深并已扩展到更广泛的领域和更多样的人群，以减少他们的痛苦。

  许多公众也会断章取义地认为治疗就是在责备父母、回避个人责任，以及将自私合理化。

  因此，我想给予那些不管处于怎样的环境之中都知道他们想把自己剩下的职业生命交付于心理治疗这项事业的受训者们以精神和观念上的支持。

  珍惜革命传统，使得美国人倾向于不相信已经建立的权威，看重新的有刺激性的东西，拒绝上一代的智慧。尊敬祖先或者求助于部落长者的人则是文化上的异族。我自己的大部分心理是与这种文化倾向相一致的。然而，同我的学生们一样，我在接受培训时我发现自己渴望听到有权威性的智慧声音。

  “我们必须牢记分析性关系是以对真理的热爱——即承认现实为基础的，这种关系容不得半点虚假和欺骗。”

  对我而言，精神动力性主任方法的首要主题乃是：我们对自己越诚实，我们就越有机会过上一种更为满意和有益的生活。此外，精神分析的敏感性承认这样一个事实：对自己的动机保持诚实对我们而言并不容易。

  P2

  精神分析的临产和理论著作总是专门致力于揭示那些我们看不见的动机，其前提为：逐渐意识到我们心理上否认的内容将减少我们将它们保持在无意识中所需的时间和努力。因此，我们更多的注意力和能量便得以解放来更现实、更富有成效、更快乐地效力于复杂的生活任务。

  在当代西方文化中，人们认为人口更具有流动性、扩大家庭乃至核心家庭成员在地理位置都分处各地、解决大部分关系问题的办法乃是分离——换句话说即想要粘在一起的愿望不受欢迎、而依赖的表现会招致鄙视。这样的文化背景下，可能精神分析的研究者们与理论家们强调依恋、关系、相互性以及主体间性就并非偶然了。

  精神分析作为一个领域，无论它如何背离典范，它都拥有一种伦理道德上的诚实，诚实优先于其他目标和包括症状缓解在内的治疗目标，这些目标的实现被视作诚实谈话的副产品。

  P10

  自弗洛伊德以来精神分析取向治疗师对研究工作的厌烦可能也部分地与气质有关：受整体论观点和欧洲哲学传统吸引的人，很少会对从事精细控制的研究感兴趣。他们更为内向、内省，并且对哪些操作才能不歪曲所研究的现象持怀疑态度。想成治疗师的人常常对在不那么完美控制的世界中助人更感兴趣。对进行有关心理治疗疗效的实证性研究感到厌烦这一现象可能在某种程度上表达了一种价值观念，即传统观念来自于医患双方在分析过程中的个人经验。但是，分析师这种不愿意将自己的信念拿出来置于研究者的棱镜之下接受考察的阻抗，可能也与那种身为社会精英的洋洋自得感有关系。在美国当前的政治氛围中，分析性治疗师依然在为曾经没有更多让分析性治疗接受实证性研究的检验而付出代价。

  分析性的思想家认为，内心的冲突或者态度的多样性是不可避免的。我们中大多数人都能发现自己有这样的欲望：希望自己既年长又年轻、既是男人又是女人、既能掌控关系又能得到他人的照顾，等等。我们对现实局限性的适应性相生相克、矛盾至极。在佛洛依德看来，人类这种动物贪得无厌，永远渴求、从不能完全满足——部分因为人类经常想同时得到互相排斥的事物。

  几年前，一名男子引起了神经病学家的注意，该男子前额叶受损，导致他感受不到任何情绪。他从生理生成为了“理性人”的类型，这是被启蒙哲学家和许多同时代的研究者理想化的人物——一个真实的百科或是斯波克先生。他的所有决策都是通过推理和逻辑做出的，而不是通过诸如同情、情绪和直觉的情感过程。他的决策中突出的一点是， 这些决定经常很怪诞，有时候很明显是弄巧成拙。在没有情绪的情况下，他似乎缺少理解其选择的全部含义的能力。据称情绪是破坏判断的主要污染物，但他不是辉煌地避免了它的干扰，而是被缺乏进行好的决策的敏感性所损害。这个人曾是一位法官；在受伤后他放弃了这一职业，因为他明白，为了主持正义，一个人必须有能力对各种各样的人类动机抱有同情心。他的尴尬处境让人想起柏拉图的智慧，柏拉图将人类的理智比作驾驶战车的人，他不只需要意志的白马，还需要激情的黑马在前面奔跑。

  情感是有意义理解和真正改变的前提，我们将什么归入到“情感”的标签下呢？经验表明，大多数人如果不经历对那些曾影响他的人、家庭、社会或思想意识的愤怒或者憎恨，他就不能实现分离、个体化，并最终形成对过去的良性接纳。所有已知的社会都认为，一个刚刚丧亲的人在恢复正常功能之前，会经历悲伤的阶段。只要一个人能够表达对无法抵抗的事情的情感反应，那么这些事情就不会成为创伤性经历。情感拥有它们自己的智慧。

  尽管分析性治疗师希望自己最终被病人内化为“新客体”，也就是说，内化为与伤害病人的那些人明显不同的内部声音；但治疗师们承认，因为无意识假设的稳定性和粘滞性，他们将不可避免地被体验为旧的客体。

  P46

  “如果治疗师没有被内化为一个新的、好的、爱的客体，那么治疗永远不会真正开始；如果治疗师没有被体验为旧的、坏的客体，那么治疗可能永远不会结束。”

  随着我们对依恋了解的增多，我们对于为什么治疗师和病人之间亲密的情感联结在病人康复中起着关键性的作用有了新的理解方式。我们天生是社会性动物，在关系矩阵中成熟，需要关系达到改变；这一点被广为接受的下述研究结果索证实，即与迄今为止研究过的治疗的其他方面相比较，病人和治疗师之间的联盟对治疗效果有着更多的影响。奇怪的是，如此多的人认为精神分析治疗没有止境，是对一个人的童年经历在智力上的重处理，而实际上，它的一个核心假设关系到体验此时此地治疗关系的真实情感能力。

  分析师们不喜欢语言他们与每个病人的专业旅途将通向哪里；但是他们相信，治疗旅途将带领治疗师和病人进入一个领域，在那里，患者的诚实感、主观能动感、掌控感、自我聚合感、自尊感、情感耐受能力以及满足关系的能力将最终得到加强。

  P50

  这种信仰认为，努力追求个人经验的真相，拥有其内在的治疗价值。

  我深信，我所讨论的态度——好奇与敬畏、对复杂性的尊敬、共情式认同的倾向、对主观和情感的重视、对依恋的欣赏、信仰的能力——不仅仅是作为治疗敏感性的成分而值得重视，而且可以成为当代生活中的疏远、麻木的一种矫正。它们的反面——理智的被动状态、武断的简化、情感的疏远、客观化和漠然、个人隔离和社会混乱、以及存在主义的恐惧——经常被学者和社会评论家看作是我们为工业化的、消费导向的、科技先进的文化所付出的代价。

  尽管作为治疗师，我们第一次工作的体验可能非常不同，但焦虑的感觉是共通的。许多学生都描绘了一种令人不安的欺骗感，甚至有自己是冒充的心理治疗师的感觉。……新手们会担心，ta试图治疗的来访者会轻易发现，自己并不比来访者更加情绪健康、社会适应性强、独立、有智慧或心灵更自由。我们都该感到庆幸的是，没有任何证据指出一个人只有成为心理健康的楷模（或其他任何种类的楷模）才能在心理上帮助他人。训练运动员时，教练不一定要是一个卓越的选手，同样，治疗师也不必一定要更成熟、更正常，对生活更满意。事实上，以Greenson的观察，即曾经经历过重大情绪困扰的人能成为更好的治疗师，这样的说法是有争议性的。没体验过心灵上的痛苦和困扰的临床学家，面临的风险是与来访者在一起工作时感到共情不足。当然，如果一个治疗师和ta的病人有相同的盲点，也会产生问题；但我们可以通过督导和个人体验解决这一问题。

  Frieda Fromm-Reichmann在Chestnut Lodge工作时，曾尝试把那些最“没希望、无法治疗”的精神病患者指派给经验最少的治疗师，因为这些治疗师不知道这些人是没希望和无法治疗的，结果反而能有成效地帮助他们。

  这是一个痛苦的悖论：从事我们这个职业的许多人都注定要永远在为经验不足而自我批评和为先前缺乏经验而感到懊悔这两种状态之间寻找平衡。

  P55

  而好消息就是，治疗师犯错误与外科医生、律师或工程师犯错不同。治疗师的大部分事物不会带来持久的伤害。

  我任教的研究生项目申请，竞争非常激烈。被录取的申请者们通常学术优异，并且他们中的许多人在工作中称得上是典范。他们对于从老师那里获得A的成绩和督导师的称赞已经习以为常。他们倾向于更加完美，他们的追求完美几乎未曾受到过严肃的质疑。但在助人的专业领域，如通常的生活一样，对完美的追求其实是——借用一句圣经的短语——陷阱和幻觉。在试图帮助他人的时候，不同的方式只有较好和较差的区别，而且即使是最好的干预方式也各有各利弊和正负两面的影响。

  尽管仍然有一些心理动力心理治疗的教师坚持认为有“正确”做心理治疗的方法，但实证数据以及你我身边的个体身上蕴含的多样性表明：有多种不同的，同等有效的方法可以促进心理治疗和这个复杂的过程，在这样的过程里人们对自己更加诚实、症状减少和自我损害减少，变得更有效能感。

  他总结道，这份突如其来的遵守一系列规矩的内在压力或者折射出了一种对体验的反应：他们在情感上受到病人情感和移情的影响比自己预期的要大。换句话说，僵化的咨询方法的吸引力在于，它也许能够帮助治疗师防御焦虑感……

  有些人可能来自于学习和实践上有明确的“正确答案”的领域，他们很难将自己的身份转化为学习一门艺术的学生。

  学习心理治疗也像学习其他科目一样，首先学一种技艺，然后才是学习一门艺术。这是事实，人们不必为此感到羞耻。

  “直到现在，在经历了37年的精神分析实践与理论训练之后，我才敢于著书论述关于治疗技术的内容，我的两个独特的性格特质必然地阻止了我更早地出版著作。第一个特质是我无法从别人的错误中得到学习。所有的智慧箴言、所有的劝诫和警告对我都不起作用。如果我要从别人的错误中学习，我必须犯同样的错误，随后才或许能够改正它们。第二个特质与上述提到的我心灵的愚钝和智力的顽固相呼应：我也几乎无法从自己的错误中学习，除非我重复地犯了多次。

  人们在新的角色中感到紧张焦虑是很自然的反应，用自己惯常的人格面具去掩饰焦虑感是非常正常的防御，但作为心理治疗师，这样的防御会变成阻碍。或许对这份焦虑最好的化解方法是，认识到精神分析心理治疗并不要求一个人智力超群、或精于世故、或对技术文献掌握得滚瓜烂熟。精神分析心理治疗里最基本的要素是治疗师真挚的希望帮助他人的愿望，以及没有防御的好奇心。

  学习实践心理治疗时最有价值的事情之一是，学会如何将个人的特质与治疗师的角色整合在一起。任何一位拜访过很多治疗师办公室的人都会对他们办公室风格的多样性印象深刻，每一个临床办公室都足够专业，同时又独具个性。每个治疗师不仅在如何装修装饰自己的办公室上差异很大，而且在他们的穿着，咨询时与病人的距离，与病人保持目光接触还是努力避开让病人觉得被审视，是否在咨询中做记录，第一次访谈时询问历史信息的详细程度，如何介绍自己的取消咨询制度，如何处理账务，如何告诉病人时间到了……等等众多方面都非常不同。

  临床工作者在放松状态下的工作会更有成效，这种状态下他们独特的人格特质能够成为一种治疗工具。治疗师在情感上越真实，病人就越能不感到羞耻地开放自己。干预会随之变得顺畅，与此同时，治疗师基本的人文关怀会帮助ta度过难关。

  我需要强调的是，做我们自己并不代表透露个人信息或漫无章法地提建议……当面对我曾经面对且成功解决了的困难的时候，不去推销自己的解决方案是非常困难的；当病人描述的冲突恰是一个我仍然饱受困扰、没有解决的问题时，不承认我自己的不足也很难。但是我们应该提醒自己，对于严重的情感困扰，那些有相似经历的人提出的建议和同情如果真的能起作用的话，就没人需要心理治疗师了。好的建议、温暖的认同往往是不乏供应的；大多数前来接受治疗的人是因为他们已经尝试了这些资源，却没有用。

  一个人可以满心愤恨地认为自己的督导师应该做得更好，并因此感到理直气壮，但这于解决问题无益。使自己适应实际工作对象的局限是一个心智逐渐成熟的过程，人会慢慢地接纳这样的事实，即这个世界由真实的人类构成，而不像幻想的那样由充满智慧的家长所掌控。

  有时候，作为学生，很难从情感上坚持成人感。

  有时候，直到几个月后，学生才有勇气告诉我，我一直反复强调某些不必要的东西，或者当他想要情感帮助时我却在给他讲理论，或者给了他一些他心里不太认可的建议，那个时候我对于被浪费的时间而感到恼怒。

  确保心理治疗不是在一种傲慢氛围中进行的一个传统惯例就是，治疗师要进行自己的心理治疗或者精神分析。

  治疗师接受治疗的最根本的原因是，治疗师能够从内心深处了解身处病人的角色是什么样的感觉。

  荣格写到了“超越功能”，指当面对想要的行动或防御的内在压力时，一个人能够保持开放的主观体验的能力。

  很多接受分析的人在意识上认为，这么做是为了继续深造或获得某种职业目标；与他们中的多数人一样，在接受分析后我震惊于这个经验是如何彻底地提升了我自己的生活。Julia Kristeva在《纽约时报》的一个采访中做了类似的评论：“出于职业原因，我开始接受心理分析，以获得另一个分析性工具……当然，一旦你躺在诊疗椅上，不就以后你也会发现，自己的确也有这方面的需要。我了解了自己很多。最后，分析不仅促进了我在文学、哲学上的长足进步，甚至使我更加来理解了我们的时代；我同时发现，治疗对于我自己也是非常重要的。”这种谦虚的经验和理解改变过程的模板的结合，是难以通过其他方式获得的。

  我支持最早由佛洛依德所提出的观点，即如果治疗师尽可能多地接受文学、神话、艺术、人文学科、自然科学和社会科学领域的教育，那么他们能够从中获益良多；这一观点也被佛洛依德的后继者们不断强调和重申。治疗师们倾向于接受“三种学科”（医学、学术心理学、社会工作）之一的狭隘训练，这些训练往往并不包括有关意义、情感、意志、关系、自由、公平和限制等深刻问题。而这些议题是几个世纪以来伟大的哲学家、神学家、艺术家和作家一直倾心研究的问题。托马斯.奥格登以绝对严肃的态度写道，当他想要加深对人类困境的理解时，他阅读的诗歌与精神分析文献一样多。

  来自于社会少数民族的治疗师实际上在该职业中具有得天独厚的优势，他们花了整整一年的时间来感受自己的边缘化，感受占优势的为数众多的群体的仪式和教条带给自己的不舒服的感觉。具有精神分裂倾向或具有害羞气质的人们也同样在该职业中具有无比的优势。与众不同塑造了对基本的人类问题进行深思熟虑的习惯，而这是治疗师必不可少的资源。

  近期有证据显示，亚伯拉罕.林肯可能曾与同性恋体验相抗争，这让我清楚为何他具有认同流浪者和奴隶的体验，并为之雄辩的惊人能力。

  事实上，心理治疗是可以将一个人最大的不幸重组为专业优势的极少数职业之一。

  “如果你想成为一名真正的精神分析师，你必须热爱真相，既包括科学真相，也包括个人真相；你对真相的欣赏必须高于遇到不愉快的事情时的任何不舒服的感觉，不管这些事实是属于外在世界还是属于你自己的内在本性。

  而且，我认为一个精神分析师应该对社会学、宗教、文学和历史等领域的事实感兴趣。否则他对病人的看法将太过狭隘。

  你应该成为喜爱读书的人，熟悉多个国家和文化的文学。在伟大的文学形象中，你会发现他们对人性的了解与精神病学家和心理学家所努力了解的至少一样多。”

  来访的病人可能比治疗师年长三十岁、或只受过基础教育、或热衷于种族歧视、性别歧视或厌恶同性恋的言论、或参加古怪的性行为，或崇洋媚外，虽然面对这样的病人令人生畏，但心里痛苦是一个巨大的平衡器。即使治疗师年轻而又缺乏经验，大多数人也能从他们那里获得帮助，前提是治疗师能够带着尊重地接近病人、承认错误、真诚表现、有效利用督导。

  虽然心理训练项目中的申请者因为“想要帮助人们”而想成为治疗师，这可能是个陈词滥调；但像大多数陈词滥调一样，这是真实的。来访者将感受到从业者真诚的、想要有所帮助的愿望，并给予治疗性的回应。一个人能够一直有所帮助，这是白日梦；但一个人努力去帮助则是一种态度，它让心理治疗成为可能。

  协商安全问题会创造出一个更安全的氛围。获得安全感本就是一个重大的治疗成果。了解到一个权威能够以尊敬的态度去适应一个人的个人需要，这对来访者而言可能是一个解放性的启示。

  P89

  “安全协议”是让有自杀危险的病人保证不伤害自己，以此作为治疗的前提条件，我对这方面的经验印象不佳。我通常会感到这种被专业工作者或雇佣制的执业机构要求签订的协议，仅仅是为了减少责任或者减轻治疗师焦虑，实际上对于保证病人的真正安全效果甚微。在这样一个诉讼成风的年代，减少治疗师的责任没有什么不对，但是曾经有很多有自杀倾向的人告诉我，他们迫于压力签署了不杀死自己的协议，但是私下里仍然保留自杀作为一个选择。实际上，一些病人说他们愿意活下去，是由于他们知道如果精神痛苦变得非常严重，他们还有一个办法解脱。

  P95

  诸如以上这些回应可能是最好的方式，接纳来访者的负性感受，既不反击也不与对方合谋贬低自己。

  P102

  举个例子，艺术家、学者和激进主义分子经常怀有一种恐惧，基于成就他们职业的敏感直觉，他们认为如果失去自己神经质的特质，就会失去灵感。

  P106

  如果治疗师简单要求病人表达在他们幻想中治疗师有什么想法和感受，而没有向他解释为什么要这样做，那么来访者可能会把提这个问题的动机归结为治疗师对于认可、信心、或者被赞赏的神经症性的需要。

  P114

  选择这个职业的人大都软心肠，让他们选择挫败那个已然受着煎熬的人，还是忽略边界而做出温暖和理解的沟通，他们通常会选择后者。

  在完全理解一本书以致不需要它之前，是不可以把书扔掉的。

  P118

  根据我的非正式观察，很多倍吸引来做心理治疗师的人，都是喜欢亲近，不喜欢分离，害怕拒绝，以及容易因内疚而痛苦的人。他们倾向于自我批判，过度承担，把别人的需求看得高于自己需求。他们更多时候会感到自己没有资格，而不是值得的。他们尝试逃避感受贪婪，愤怒，和其他“自私”的念头，当他们意识到自己有竞争或敌意的时候会变得不安。他们偏爱反向形成这种防御机制，企图通过照顾来访者心里的小孩来滋润他们自己心里的小孩。他们认同受害者而不认同暴君，认同孩子而不认同父母。

  心理治疗师会在付出中获得快乐，却不大敢索取，害怕他们的渴望会引起对抗。当别人特意靠近他们时，他们会深深地被打动，因为，私下里，他们认为自己不值得获得这些。当病人有所进步时，治疗师会倾向把事情归因为病人的个人动机和成长的能力，而当病人情况进展不是很好时，他们往往责怪自己。

  适当限定的设置可以表明从业者不认为来访者是如此的可怜或者绝望，以致无法对他们说出的要求说“不”。

  我大女儿两岁大的时候，一次她因为我设定的一些限制大发脾气。我对她的暴怒感到绝望，开始我就尝试用这种方法来处理它，我说：“我理解你为什么生气，苏珊，但是……。”她用尽了所有的力气大喊，“你不理解！”我一下子明白了，她需要有人反对她、跟她打架，我的“共情”姿态只会让她感觉到，她不得不放弃她真是的感受或其他的什么——她因为折磨一个自己爱的人而痛恨自己。真的，即使她只有两岁，她也能感觉到在她让我这么为难的时刻，我尽力保持一种合理的、支持性的姿态是一一种反向形成，而她用她那原始的方式告诉我我应该更诚实地对待自己。

  P127

  如果因为我们的弱点而不是因为病人的终极利益，让病人的喜好而不是治疗的必要性控制了我们，那是非常遗憾的事情。

  我的临床经验一直都和佛洛依德式的最初观点一致，那就是人们会将他们不记得的或者不允许自己去感受到的东西见诸行动的。

  一个新手治疗师首先要带着敬意去做有关费用的事情，就是记住做心理治疗是他赖以为生的方式，心理治疗师受人尊敬的和经过了严格培训的方式，这是需要接受广泛大量的培训的，这比提供快餐有着更多的价值——即使心理治疗在开始的时候感觉就像“只是坐在那里尝试去理解”。在当代的西方文化，尊重的倾听应当获得体面的酬劳得到的证明太不充分了，而比起行动、生产、制造和获得等这些为基础的行为，我们会倾向贬低倾听这种行为收费的可接受性。

  P141

  多数过度依赖的病人，拥有强度相当的表达愤怒和反对的需要。因此，在可获得性上设置合理的限制，比使他们更加婴儿化的过度照顾更为可取。限制给这样的来访者提供了愤怒的快感，接下来他们就学会了利用愤怒的能量来满足他们自己的需要，根本不用提及治疗师在他们狂怒的长篇演说过程中坚持跟他们呆在一起这个事情，就像被青春期的孩子暴怒反驳后的父母依旧保留着对孩子全心全意的爱一样。

  明显的为自我利益服务的解释比起利他式的解释更令人信服。

  你这样做让我放松下来了，你不像我妈妈，你会保护自己不让自己生气。被人不情愿地照顾是很令人羞耻的事情。

  边界问题需要所有人的临床创造性。边界问题为所有的治疗师制造问题，而不单单为那些具有心理动力敏感性的人带来问题。实际上，因为关于隐私、时间、金钱、取消和可获得性具有职业关系的特征。

  P149

  心理治疗师不为他们的伟大辩护——他们属于那部分凤毛麟角的致力于超越自己的人——但某种程度上他们减少人类人为的苦难。他们站在你身旁支持你。他们忍受仇恨，而不转身离开。爱以它们的方式到来，但治疗师们不受诱惑。他们是倾听者，他们的倾听目标坚定，他们的沉默没有寒意。——Alrzzv Wheelis

  成为精神分析师的儿科医生温尼科特强调，对婴儿来讲，体验“在妈妈面前我是独一无二的”感觉对发展同一性和胜任感是非常重要的。从理论上讲，对于心理治疗的病人来说有着类似的感觉，即“在治疗师面前我是独一无二的。”调整自己适应于来访者的角色，渐渐习惯于重视自己，尊重地倾听自己的心声，对来访者而言通常是一个新成就，为得到这个经验他们需要相当多的支持。帮助个体乐于从事检验生活的目标需要足够的机智、耐心和技巧上的灵活性。

  社交会话通常会包括许多不相关的“噪音，这些“噪音”的产生是因为会话双方都有自我表达和从对方获得确认的需要。朋友可以打断谈话、互相讨论，随意变换主题。相反的，具有专业能力的倾听是受过训练的，沉思默想的，情感上接纳的活动，在其中治疗师的自我表达与自我确认的需要服从于来访者的心理需求。

  常听人们形容精神分析治疗师是“就坐在那儿收钱”。他们应该知道仅仅只是坐在那儿有多难！如果做得好，“仅仅”坐在那里就能够鼓励来访者获得足够的勇气来吐露他们的痛苦，找到自己问题的解决方案，在等待他们增加自信和能力的人面前找到自己的主体感。

  我们生活在这样的时代和文明之中：强调在做什么而不是存在本身，流行的科学观念强调预测和控制，而不是受过训练的自然观察；受欢迎的专家们劝告人们如何对他人具有不同的影响力，而不是如何让他人舒服地做他们自己。

  我们需要清空我们的头脑，并尝试无偏见地接收病人的想法和感受。他强调，治疗师的作用是做一个“容器”，以容纳对病人来说因毒性太大而难以忍受的意向和情感。

  那些有过相当多内省训练背景的病人，包括之前有过分析治疗的病人，我可能会这样跟他们讲：在一段时间内，他们对自己的了解比我对他们的了解多得多，如果他们忍耐我一段时间我将会很感激，在此期间，我将会尽力理解他们对自己的了解。对这些声明很少有人做出愤怒和不耐烦的反应；相反，来访者似乎松了口气，因为我不会试图强加给他们我的先见理解和偏好建议。

  治疗早期，让沉默延长或积累是不明智的。

  精神分析治疗师的主要目的是鼓励自由表达。我们这样做的效果是可以让病人有这样的体验：在一段关系中，诚实是可能的。

  P155

  对自己的洞察是精神分析性治疗的目标之一，但自我接纳是一个更深刻的目标。一个人对自我这些觉得丢脸的部分接纳得越多，则越不容易被它们控制。

  有时我们作一个快速连接，使我们对病人讲述的关于他或她原生家庭的事做出看似漫不经心的评论，以表明他们坦露的事情一点也不奇怪。或当病人坦露心中的罪恶，感到快被羞耻淹没的时候，我们喃喃地嘀咕一句：“嗯，那是自然”，或用一种疑惑的语气问：“那么，关于这件事儿，什么会让你觉得如此可怕？”

  想在病人面前证明我们有能力，有东西可以提供给病人是很自然的事情。这种倾向会阻碍我们保持足够的自我克制，以让病人自己发现生活中的问题并提出自己的解决方案。治疗师必须小心不要占来访者的上风。

  除了拒绝从前的完美主义，随着时间的推移精神分析界在很大程度上走出了早年天真的信心，即相信治疗师有能力“揭示”个体历史的真相，用考古学家挖掘废墟或侦探解开一个谜一样的方式；取而代之的是，我们认为心理治疗事业是资咨访共同努力以发展一个叙事，这个叙事能够赋予个体主观经验和个人问题以意义。

  P159

  当非常接近感受的时候改变话题，对更隐私一些的话题用娃娃腔等其他一些装模作样的方式谈论，以及许多其他的无意义策略，用以与痛苦和羞耻的感受保持一段距离。

  精神分析治疗师如此喜欢婴儿—照顾者关系相关文献的原因之一是：使得自己与病人的特异风格同步的过程，感觉与父母努力适应自己宝宝的独特气质和节奏的描述惊人的相似。

  P165

  也有一些其他的病人——例如，事实上所有明显的精神病性个体、一些具有精神分裂性动力的人、大多数具有偏执心理状态的、自恋类型的人，或者明显轻躁狂的病人——他们是如此怀疑或者害怕母亲式的接纳，以至于他们不能将这种接纳理解为支持，知道他们确定治疗师足够独立、足够有力量、意志足够坚强，可以承受他们看世界的方式，并能够在他们有毒的状态中存活下来。

  在我觉得他还不可能改变的时候，我可以真诚地接纳他的症状，但当我开始觉得他在低估自己的能力时，我就变得怒火中烧了。

  我的一位导师，拘谨的，稍微有点社交窘迫的男士，说自己是精神分裂症患者，他非常强调自然而然、温暖、真实、活力和灵活。另一位导师，一位慈爱的，开朗的、合群的人，取笑自己的歇斯底里和暴露倾向，将会详细地论述克制，纪律，谨慎，以及就各项“参数”最审慎的应用。我逐渐意识到我的每一位督导最想传递给我的是修正他们自己的性格缺点的倾向。这也是每个人把自己当作病人时，感觉最能治愈自己的态度。

  多年来我得出一个结论，当临床医师们极其热烈地谈论某一态度或过程是疗愈过程的“核心”或者是“精华”时，他们往往规定了这样的立场：要么是正常化他们自己的性情，要么是补偿他们自己的性格缺陷。无论在哪种情况下，他们都好像在试图治愈他们自己。泛化那些在自己的心理状态基础上归纳出什么有利于治疗通常是有帮助的，因为作为人类，我们的相似性远大于我们的差异性。

  但是因为每个人的弹性都有限度，一些病人将不适合某个特定治疗师的真实治疗风格的范围。我不建议任何执业者，无论是新手还是经验丰富者，去尝试采用让人感觉虚假或者与自身气质倾向相差太远的语气。

  任何被从平等的机构职位提拔为上司的人都有过令人吃惊的情绪经验：即他以前的同事立即开始以一种特别谨慎、顺从或敌意的方式与其互动，不管他们以前在一起是多么的放松。角色和地位是强有力的实体。在世俗的西方社会，作为一个治疗师也许在心理上可以与其他文化中的大师、宗教领袖、导师、方士、先知、巫师、长老、圣人，及其他部落权威的神圣任务的地位相媲美。

  一旦有人被认为处于一个有权利的位置，对ta来说就几乎不可能以自愿脱离角色的努力来抵消对方对权力的认知。我曾在教育董事会任职，发现里面的成员有时会感到愤愤不平，因为即使他们试图“只是作为孩子的父母，而不是作为学校的董事会成员”与孩子的老师交谈，却发现老师无法没有防御地和老师的雇主说话，无论当下该董事会成员把自己看作什么。

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  我记得我想过，“我对我的治疗师这样反应是有作用的——毕竟，他是一个非常强大的人，但我只是我。”我们总是作为一个孩子、一个依赖他人力量的人，甚至是单纯无知的人进行着原始的认同。

  我怀疑，大多数临床医生是否充分了解他们权力的性质和程度。由于性格和职业，大多数治疗师自动认同脆弱和相对无力的特点和角色。我们所有人不仅都怀有我们童年信念的记忆残渣，而那些记忆却是由他人掌控的，而且我们也都反复经验到：我们的工作起效是是多么缓慢。相对于吸引我们用某种方式谋生的补偿性童年幻想，我们必须一再承认我们曾经想象过拥有能够引起戏剧性救援效果的能力是多么小。因此，每当一些不经意甚至谨慎的共情性评论招至来访者破坏性反应，都可以是一次猛然觉醒。治疗师即使在临床情境以外也仔细权衡自己的言辞而著称，并不令人惊讶。这是一个很难打破的习惯。

  在进行顺利的心理治疗过程中，来访者逐渐感受到更真实的力量感，而减少对他们治疗师力量的依赖，更多情绪上的平等，更少角色上的自卑感。

  几个世界以来，男人和女人都在搜寻可酿制爱情药水的曼德拉草的根和其他物质。然后……维也纳的一个犹太医生发现了爱的秘密。这个秘密就是仔细倾听，真诚地对其他人感兴趣，以接纳且无羞耻的方式对ta的披露做出反应，并不要求对方满足自己的情感需求——这定义了精神分析设置的方方面面。

  精神分析为分析过程提供了一个仪式化的设置，这个过程会鼓励被分析者发展对他自己的亲密意。在此过程中，分析师和被分析者不可避免也是必要地在智力和情感上彼此密切地卷入。这一努力的核心……是对爱、被爱、给予爱和接受爱的受挫能力的再度活化的寻求。除了考虑我们的职业选择以外，这看起来更适合描述被分析者而不是分析师。我们之所以选择我们的工作，是不是因为，至少是部分因为它为我们提供了实现这个目标的手段呢，即让我们对我们的分析者来说特别重要——尤其是被他们爱和尊重？

  我们重复着过去的痛苦

  树立一个个人的榜样，这个人坚持在合理的条件下工作，赚取生活工资，他的时间是宝贵的，他要求其规则底线得到尊重。这就是你会让你的病人怎样去主宰自己的生活的榜样。

  P223

  在婚姻和工作之外，她没有重要的人际关系。

  她的情感很收敛以至于不可接近，她的身体动作很僵硬刻板，并且她的情绪状态既压抑又焦虑。

  她几乎不能识别自己的感情，更少能找到表达这些感情的方式。

  莫莉努力借助将自己受照顾的需要投射到别人身上，并且照顾别人来满足自己的需要，这是另一个核心的防御。她有超凡的热情去照顾别人、有需要的人、丧失亲人的人。

  莫莉的母亲不断地将她置于照顾年幼孩子的位置上，同时报以最高级别的挑剔和最低水平的情感支持。

  若把我们治疗关系的头几年只说成是风波不断，就等同于把飓风说成是大风。

  P271

  一个人在自己心中知道一件事情，与外部的某人那里听到这件事是不同的……在生命中的紧急关头并肩，爱是伟大的教育者，而且正是凭借最接近的他人的爱，不完整的人类才能够尊重必然存在的需要……

  就像我的一个病人表明她从来不知道对自己的孩子有敌意幻想是正常的一样，一些病人在心理治疗中所学到的东西构成了于他们而言全新的信息和观念。而且病人们所学到的东西中，有些正是他们在理智层面所“知道”，却从未在情感上接纳的一些信息。因此，我的一位病人说道，“我本该在我们治疗开始的时候就告诉你，我害怕遭到拒绝，可我不知道这严重到一直影响着我做的每一件事情的程度。现在我感觉得到那种害怕，并且对这种情感的认识有助于我应付这种情感。”

  P275

  我们的病人中有许多人在治疗里学到的相关课程就是弥漫和烦扰的情感状态可以被加以命名并顺畅地整合到认识当中。

  唐娜在深层次地懂得情感和行为是两件不同的事情的方面并非唯一。许多自我控制得多的人来治疗时也不能领会这种差异。来到治疗室时，他们深信自己有不可饶恕的想法就是犯罪，而且将他们负面的感情视为自己堕落的证据。确实也只有很少的人，必须由治疗师以严肃的讲授方式来说明性或敌对幻想与色情或攻击行为之间的差异。

  依据我的经验，无论你多么地投入，无论你在病榻边花费多少时间，你都将可能在父母去世后感到自己本该做得更多。我很怀疑现在的照护能防止你往后的自我批评。那自责似乎只是哀伤早期的一个组成部分。我认识这样一些人，他们是奉献的楷模，即使他们在所爱的人弥留之际紧握着对方的手，他们仍然因为没有再多说一次我爱你而严惩自己。

  在美国，被广泛认可的建立生活的方式是缺乏人道的，达到了一种社会文化的精神病态程度。近年来，我发现我越来越多的挑战病人们对于自己能绷多紧就绷多紧的信念。我大声表示质疑他们是否会后悔没有花更多时间与年幼的孩子们在一起；我诘问他们为何要接受要求他们白天黑夜随时待命的工作；我追问他们如果每周工作60小时、照顾两个学龄前儿童和一个十几岁的继女、还要照顾一只狗、一套房子、一条船和一对年迈的父母，那么如何期望生活会快乐？

  经由物质积累来追求快乐注定是失败的。

  P284

  和大部分病人相比，精神创伤的历经者们更加戏剧性地将我们与曾经伤害过他们的人混淆在一起。区分现在与过去的缓慢过程永远是这一类病人治疗体验的中心。

  在精神分析治疗中，我们从直接的体验中了解到一种被严格限制于谈话的关系可以非常亲密，到了足以令我们惊喜、安慰我们、养育我们以及感动我们的地步。无论我们是否进入治疗来提升与他人的联结，通过清晰地说出非常个人的思想和情感所发展起来有所提高的技能都会转移到其他各处。确实只有极少的人经历整个密集治疗却没能学到一些关于如何充实自己的友谊和恋爱关系的东西。

  过去几十年索实施的调查显示，至少在美国，许多人抱怨对想要同某人建立性侣关系的渴望正在衰减。无论是异性恋者、同性恋者、双性恋者还是变性者，最近这些年来去找治疗师表达情感的匮乏和性的冷漠比因具体的性功能障碍而求助者更常见。

  在《爱能持久吗》一书中，则争论说亲密感对我们而言比孤立感更加可怕。Deborah Luepnitz 在此主题上论述的灵感来自于哲学家叔本华索使用的比喻，叔本华含蓄地将人类比喻为寒冷夜晚的豪猪：我们需要相互靠近来得到温暖，但是当我们刺痛彼此的时候，为了不受到伤害而需要分开。然后，我们开始冻僵，并且再次靠近，一次循环往复。

  主观上感到“空虚”的病人很容易在治疗中学到的是，自尊不是依靠获胜、征服或化学作用下的兴奋累积来供给的，而是由内在动力感的发展维持的。病人学着向内寻找感到真实的东西，而不是向外寻找转瞬即逝的快乐，并且学着接受真实的东西，和学会去接受事实，而不再致力于追求完美主义理想。这种转变不是道德说教的结果。确切地说，从最小的治疗事件中抽取意义的过程有利于加强活在当下的能力，也有助于停止不断将此刻与某些幻想的更好时刻相比较从而更能享受此时此地。

  进入心理治疗的时候，我们通常怀有一种强烈的希望，就是我们能够通过某种方式改变父母、配偶、老板和家庭成员来解决我们的问题，这种希望有时是有意识的，有时不是。其实我们所能确实改变的唯一的人就是来到治疗的这个人，认识到这一点在情感上的确很痛苦。而这构成了我们对儿童式愿望的一次重要的摒弃，并且通常卷入一个漫长的悲伤过程，放弃改造他人的工程，放弃让他们最终听到我们的声音，放弃让他们有所回应，放弃对我们主观现实的辩护。

  父母们担心见了心理治疗师的孩子会被披露他们最严重的失误，或者将受到鼓励而把父母视为无知蠢货或妖魔鬼怪。在治疗的早期的确如此，许多病人触发了对家庭成员的怨恨，并且灵敏地知晓他们年少时期的权威人物有所不符合理想父母的方面。但是随着时间推移，随着失望渐渐得以哀悼和接纳，相反的态度开始浮出。人们开始认为父母和其他的权威人物在他们能够应付的情况下已经尽了全力了。随着病人们自己越来越像成年人，他们开始懂得成年人也不过是人类。那种世间万物都要公平的婴儿初期的愿望开始由心的观念所取代，即尽管生活不一定公平，但它也包含着创造性、欢愉及满足的良机。

  不断提升对自己和他人同情心是一个与缓解痛苦同等价值的治疗目标。

  和做一名独立从业的心理治疗师相比，没有什么事情是我更想用来谋生的。因为不断有机会进行深入的学习，我感觉获得了滋养，我可以控制我的时间投入和工作环境，我确信我所做的事情很有价值，并且我始终如一地因处于受到尊敬和信赖的地位而感动。每一位病人和接受督导的人都很不一样，工作很少令人感到乏味。然而这些特权还是都要付出代价的。对于那些从孩提时代就心怀强烈愿望想要对别人有用的读者，或者很有必要了解专业助人者角色的缺点和限制——不能太早开始编排自己伟大的拯救计划。对于那些没有感受到那么强烈的内在呼唤以及不太确定自己的性情是否适合做精神分析治疗师的人来说，这一章来评估你是否向着正确的职业方向前进上，可能有些用处。

  就像在任何的职业中一样，在心理治疗事业中存在着明显的现实性劣势，而其中许多劣势都与其优势紧密相连。在每一位病人那里，我们都面对着未知。对于每一位新病人，都无法重复上一次的做法，我们不得不从零开始，弄清楚自己怎样和此人进入有意义的谈话中，自己怎样变得有帮助。我们承担着容易让人退缩的责任，而且有的时候真的没有足够的力量去承担。我们可能面对可怕的甚至是危险的心理病理表现。假如我们说错话，我们的话可能铭刻在病人的脑海中，并且一次又一次地回来与我们纠缠。我们反复面对自己的限制和失败，我们长期遭受着内心的压力，尽人类之所能去保持自我的真诚与诚实。

  P296

  除了处在边缘水平的病人会对我进行疾风骤雨般的情感冲击以外，在那个时刻其他病人们不会令我感到精疲力尽。就像一些运动员报告说他们直到比赛结束后才意识到感觉疲劳一样，我直到离开办公室的的时候我才意识到情感耗尽的状态。

  我的女儿海伦，在他长大到能够分辨一个成人真正主动关心式的倾听与只不过使用了一种感兴趣的表情直接的差别时，曾经责备说在我和病人们工作之后就患上了“倾听无能”。

  我们常常想要重塑整个家庭系统，或为病人或病人的亲戚进行思想移植，然而，我们必须得安于小的调整。或许顺应一些限制本质上是很劳神的，因为这关乎因放弃更加远大但不现实的目标而引发的伤感。

  治疗师们对病人的帮助很少能像人们希望的那么快和那么多，有时他们不得不承受治疗对病人毫无益处的结果。

  在一个治疗师身上，一定量的万能感可能是一种有价值的资源。早年我坚决相信我能帮助任何人。只要我足够努力地去理解和治疗对方，这种决心可能促进了我一些最困难的病人得以康复。因权威感而产生的信心生发出希望，而希望本身有着强大的治疗性力量。

  我们中那些怀有强烈愿望想要解救他人的人，渐渐习惯于一种令人痛苦的自我批评。

  我和同行们发现，一旦经过多年实践工作而形成习惯，非常容易就能放弃自己在人际关系中的渴望，哪怕在友谊中也如此，并且也会给他人的愿望以特权——就像在治疗关系中所作的那样。我在给病人提供治疗服务当中变得如此习惯于搁置很多互惠关系中非常普通的东西，在此之后，我不得不在现实当中重新训练自己成为一个普通人，能够拥有自己的空间，拥有需要，会说我想要什么活着我对我们之间的某事有何感受。

  有一个很少被讨论的职业危害，但是在我提到的时候，我的同行们告诉我他们已经识别出来了，这就是心理治疗实践破坏了闲谈、聊天和鸡尾酒会的现象。治疗师会习惯地力图保持触及真实的、情感上重要的、以及无防御的内容，以至于善意的玩笑也变成一种严酷的考验。我注意到几年前，当一位朋友对我说一些逗乐的、讽刺的或者纯粹幽默的话时，我要花上一小会儿才能听明白。

  当我和病人在一起时，如果我对听到的事情发笑将会造成专业上的灾难。

  P310

  自恋扩大

  接受我督导的人们常常对我这种讲话报以赞赏。

  治疗师们都应该确保自己定期或时常偶机会置身于一些不知道也不关心他们靠什么为生的人当中。

  治疗师们的自大不可避免地在巧妙技艺的实践中频繁地得到强化，这可能可以部分地解释分析师们专横放肆、傲慢自大和倨傲轻蔑的态度从何而来，最糟糕的是还用这种态度公开地彼此相待，以及对待其他的专业人员。

  依靠如此有意义和积极的工作来维生确实令人感到满足，在我最初开始从业时，这些工作让我获得一种特别的奇妙感觉。刚起步的治疗师们曾经时常对我说，因为做了一些他们若是提供得起就可以免费提供的工作而获得报酬的感觉“不太真实”。

  在刚从业的头几个月乃至几年，除了刚才提到的满足感以外，最主要的回报还包括对人类心理和助人技巧的学习与经验快速提高。

  对于从事实践工作的治疗师来说，在情感上以及理智层面都不断受到吸引，来认识每个人独特的内心和主观世界。而这种满足感会立即出现。精神分析并不枯燥乏味。哪怕是在感觉到乏味的时候，治疗师也会立刻对为什么乏味的感觉正侵入治疗空间的问题而产生兴趣。每个病人都是不一样的。每个病人打开了一扇新的窗户，看到一个生命可以怎样活着。只是通过以我们一直认为（意识到或未意识到）的“自然”或“正常”的情形来提供对照，每个病人就能教给我们一些关于我们自身和家庭的东西。因此，就像更加理解每一位病人一样，我们也更加了解自己了。从业者不断深入且精确的自我了解这一额外收益是心理治疗作为一个学科所独有的，尽管我也曾听到演员们谈到从他们职业中获得类似的收益。

  我们被迫毕生都要努力去不断拓宽对自己的认识。这种朝向自我认识的推动力会触发一些痛苦和羞愧感，但最终令我们获益，这种获益超越了我们的临床角色的层面。

  我个人发现通过别人的经历来丰富我的自我不是我轻微的满足。从一个生活的有限范围……我通过工作体验到各种各样丰富的生活……所有能想象到的环境、人类的悲剧和喜剧、诙谐幽默和严酷阴郁、失败的悲怆、以及对人类命运难以置信的忍耐力和一些灵魂所获得的成功。或许使我真心实意地选择成为一名精神分析师的正是每一种类型人类经历的丰富多样，这些经历已经成为我的一部分，在只此一次的凡人生活中，我永远不可能体验或理解这些经历，但我的工作却可以让我做到这一点。

  人们通过深层次的亲密关系得以改变，在这种关系中，他们的防御滑落，他们大部分的原始情感浮现，并且他们有机会去认识自己，也获得不同感受。大部分人只有有限的途径获得这种体验。当他们坠入爱河或当他们有了一个孩子，或者当他们完完全全投身于分析的过程时，这种体验才会发生。而我们则不同，我们不断有机会去参与这种有着改善力量的亲密关系。

  根据我的意见，做一名治疗师最根本的满足感在于有机会靠诚实、好奇、以及受他人所托努力去做正确的事情来谋生。

  我认识的许多经济上很宽裕的人将他们的工作视为负担，部分因为（我假设）工作没有明显地满足他们感觉自己很重要的需求。尤其是在最近的金融气候之下，他们可能压力很大、过度工作、以及为就业保障而焦虑。他们提高生活价值的愿望——常表达为想要“回馈”社区的感受——常常无法借由职业来满足。于是他们加入服务组织，为慈善团体捐款，参加非营利机构的理事会，出于某种原因担任志愿者，以及介入教会、政治行动和文艺活动。

  有一类治疗师也许会几近消失，他们有着和一些自我牺牲的基督女信徒变成无个性之人的相同方式。这些人只为别人活着，而不是为自己而存在。当心理治疗日复一日地进行、治疗师就会变成“非人”的危险，就像妓女的孩子不仅全都是私生子，而且是一种虚幻而非真实的存在……对于治疗师来说，找到能够为自己而生活的领域是很重要的，在这些领域当中，需要他们自我表达，而不是自我克制。

  与我们许多人被灌输的假设相反，利他主义并非与自利行为势不两立。我最终相信，真实而有效的利他行动依赖于较高的自利水平。

  精神分析师必须有机会在回到家的时候停止做一名精神分析师。当他离开办公室时，就应该感到像一个自发的、全心全意的、完整的人那样自由地做出反应……他需要一个可以暴露弱点地方，不但不因此而受到惩罚，而且甚至让其拥有的弱点被看作是惹人怜爱的品质。热爱与赞赏一个聪明的人很容易，但只有一个真正充满爱的妻子会钟爱一个在家里很愚笨的人。而精神分析师需要这个。假如他真的全心投入工作，那么他的工作就会抽取太多情感，以致让他衰竭。当分析师回家的时候，他需要一些情感上的营养。

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  随着一个人成长成为治疗师，学习进度开始变缓。首先，这会是一种缓解，我们终于失去了全速学习基本知识的动力感。然后开始因失去透彻、快速吸收知识的激情而有些忧虑。经验丰富的治疗师们说，有一段时间他们开始对工作只是做做样子而非感到富于创新。正如Rmmanuel Ghent提到的，“当解释变得听上去像是陈词滥调……我们就正在通向分析性枯竭症候群的道路上了。”治疗师职业生活中的平淡感应该提醒他们需要去面对一些新的思考和工作方式了。

  在写作中发出的声音从一个孤立的的人内心深处传递到另一个孤立的人内心。精神分析师一种写作疗法，而不仅仅是一种谈话疗法。写作有助于将多次治疗的体验组织起来，但也有助于探索以及创造这一体验。

  当我沉浸在精心撰写一篇文章或者书籍章节的时候，我便进入一个独特的地带，一种并不专一但又全神贯注的意识状态，我内心深处某个寻求表达的部分感到舒适自如。Stephen Mitchell 设置了纪念性的意识，就是最开心的星期三上午，这是他为撰写书籍和文章仔细保留的时间。我发现大部分刚出道的治疗师认为专业写作是一件非常遥远的事，属于更资深的人们，但是他们也有重要的话要说，并且常常发现可以以专业写作的方式来抒发。一旦撰写文章、提交文章、回应批评和重新改写的过程脱去神秘的外衣，人们便会更加上瘾。